优化入肝血流阻断方式对肝癌生长和转移影响的实验研究

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luoyanxiang
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目的:观察不同入肝血流阻断方式对小鼠肝细胞癌生长和转移的影响,为临床上肝细胞肝癌切除术选择合理的阻断方式提供实验依据,同时为探讨入肝血流缺血再灌注损伤对肝细胞癌生物学行为的影响提供有益线索。方法:选择健康雄性昆明小鼠32只随机分为四组,即:假手术组(Shamoperation,SO)(n=8)、完全阻断组(Occlusion of the portal triad,OPT)(n=8)、保留肝动脉持续阻断门静脉组(Occlusion of portal vein,OPV)(n=8)和间断完全阻断组(intermittent clamping)(n=8)。采用门静脉注射小鼠H22肝癌细胞的方法建立肝癌模型,注射肝癌细胞后3天,采用阻断范围为左外叶和中叶、阻断时间为60min的入肝血流阻断方式,观察指标包括小鼠复流后24h、5d的肝功能变化情况、小鼠复流后24小时的髓过氧化物酶(MPO)以及病理学变化,小鼠复流后5d肝脏肿瘤组织的增殖性细胞核抗原(PCNA)和肝脏肿瘤置换面积(HRA)来评价肝癌组织生长和转移的程度。结果:1.门静脉注射小鼠肝癌细胞8d,假手术组小鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)值为(66.5±22.3) U/L,复流后24h,OPT组为(858.2±150.3)U/L,OPV组为(486.4±137.5)U/L,INT组为(719.3±138.8)U/L,均数两两比较有统计学差异(P<0.05);复流后5d,OPT组为(276.3±80.5) U/L,OPV组值为(89.6±28.4)U/L,INT组值为(177.5±60.2) U/L,INT组与OPT组对比无统计学差异(P>0.05)。假手术组小鼠AST值为(301.3±126.2) U/L,复流后24h,OPT组为(2065.3±150.7)U/L,OPV组值为(1387.6±189.1)U/L,INT组值为(1622.4±146.7)U/L,均数两两比较有统计学差异(P<0.05),复流后5d,OPT组值为(1126.4±285.5)U/L,OPV组为(438.6±150.7)U/L,INT组为(666.3±220.2)U/L,INT组与OPT组对比、INT组与OPV组对比、INT组与SO组对比、OPV组与SO组对比无统计学差异(P>0.05)。2.门静脉注射小鼠肝癌细胞8天后,对照组阻断叶的HRA(%)值为(7.658±2.552),OPT组升高到(35.612±4.234),OPV组升高到(9.02±3.006),INT组升高到(19.946±4.098),两两对比p﹤0.01;对照组非阻断叶的HRA(%)值为(8.107±2.003),OPT组升高到(8.698±3.021),OPV组升高到(8.607±2.304),INT组升高到(8.356±2.521),均数两两对比p﹤0.01。对照组中阻断叶与非阻断叶的肿瘤HRA值的比率为1,OPT组为2.82,OPV组为1.1,INT组为1.8。假手术组中右叶的肿瘤负荷接近于左叶和中叶的负荷,肿瘤生长的HRA比率几乎为1。从这个结果来看,在未经历缺血再灌注损伤的假手术组小鼠肝脏中,左叶和中叶与右叶肿瘤的生长速度同步。而OPT组小鼠中,左叶和中叶与右叶肿瘤的HRA比率是SO组的5倍,OPV组是SO组的1.2倍,INT组是SO组的2.7倍。对比非阻断肝叶肿瘤生长的速度,各组之间无明显差别。3.几种阻断方式阻断60min复流后24小时肝脏组织病理学变化,SO组可见肝小叶结构清晰,肝窦条索状结构完整,肿瘤细胞周围见少许的坏死区域,OPT组可见肝小叶结构基本清晰,肝窦条索状结构相对完整,肝窦内炎性细胞明显浸润,部分肝细胞分裂相明显,处于损伤修复状态,肿瘤细胞周围见有大量的坏死区域,OPV组可见肝小叶结构清晰,肝窦内少量炎细胞浸润,分裂相肝细胞较少,肿瘤细胞周围坏死区域较少,INT组可见肝小叶结构基本清晰,肝窦内见有大量炎性细胞明显浸润,分裂相肝细胞相对较少,肿瘤细胞周围见有大量的坏死区域。OPV组肝脏组织损伤程度明显低于OPT组和INT组。4.几种阻断方式阻断60min复流后24小时MPO变化,对照组测量小鼠正常MPO值为0.3005±0.062(活力单位/克湿片),复流后24h,OPT组为0.7304±0.087(活力单位/克湿片),OPV组为0.586±0.099(活力单位/克湿片),INT组为0.7004±0.089(活力单位/克湿片),OPV组的数值明显低于OPT组和INT组。5.几种阻断方式阻断60min复流后5天PCNA在肝癌组织中的阳性表达,SO组PCNA标记指数30%,OPT组为78.2%,OPV组为45.4%,INT组为60%,OPV组的数值明显低于OPT组和INT组。结论:与完全肝门阻断组和间断完全阻断组相比,保留肝动脉持续阻断门静脉的入肝血流阻断方式可以减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤,同时减缓肝细胞癌的生长和转移。
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