【摘 要】
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叶绿体是植物细胞中由双层膜包裹的一种细胞器,承担着影响植物生长和繁殖的重要生理功能。叶绿体通过分裂的方式进行增殖,分裂装置中有若干蛋白质以复合物的形式发挥功能。AR
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叶绿体是植物细胞中由双层膜包裹的一种细胞器,承担着影响植物生长和繁殖的重要生理功能。叶绿体通过分裂的方式进行增殖,分裂装置中有若干蛋白质以复合物的形式发挥功能。ARC6是位于叶绿体分裂位点处的单次跨内膜蛋白,N端朝向基质侧,而短小的C端在膜间隙中通过直接相互作用将PDV2募集到分裂位点,ARC6和PDV2的相互作用有效地将位于叶绿体内外的分裂装置联系起来,这一过程如何实现是目前的研究热点之一。本论文成功构建了关于ARC6 (646-801aa)、PDV2 (236-307aa)、 ARC6 (76-618aa)的克隆,通过将蛋白连接His标签或GST标签,我们成功将其在大肠杆菌内进行了表达和纯化,并获得了ARC6(646-801aa)和PDV2 (236-307aa)的蛋白复合物。通过进行结晶实验,我们最终获得了6个可供晶体生长的池液条件,经过一系列的优化,我们最终在HR2-112-3#条件下获得了高质量的蛋白晶体,并收集到了有效的衍射数据。之后我们成功制备了ARC6 (646-801aa)的硒代甲硫氨酸衍生物蛋白,并获得了其晶体,也收到了有效的衍射数据,得到了晶体的相位信息。同时,本研究还对ARC6 (674-801aa)和PDV2 (280-307aa)进行了共结晶实验,以期望获得其蛋白复合物的结构,目前也已获得了1个条件的晶体。对于ARC6 (76-618aa)蛋白,我们获得了2个可以供晶体生长的池液条件,经过优化之后,目前获得了ARC6 (76-618aa)已经优化好的晶体。
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