入射照明激光对激光扫描共聚焦显微镜成像影响的研究

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激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscopy)是研究微细结构的有效技术手段和必备的大型科学仪器,在生物和工业检测领域得到了广泛应用。该系统采用精密针孔滤波技术,使得只有处于焦平面位置上的信息能够被探测,最大限度地抑制了非聚焦平面的杂散光,具有很高的成像分辨率和信噪比;同时系统沿Z轴方向可以实现无损光学断层扫描,从而实现对较厚样本的三维成像本文通过理论建模并对模型进行了计算分析,最后搭建LSCM实验光路进行验证,来说明入射激光对共聚焦显微镜成像质量的影响。理论建模是根据Richards-Wolf以及P.Torok的矢量衍射积分,建立了一套LSCM在N种介质N-1层界面中照明点扩散函数(point spread function, PSF)的模型,并且计算得到零层和两层界面两种实际情况中的PSF。根据理论建模的内容,通过改变入射激光偏振态、入射激光充溢系数βG以及改变探测的深度,得到了点扩散函数的计算结果。结果表明,当采用圆偏振光和线偏振光入射的时候,圆偏振光在一个方向的分辨率要优于线偏振光,但是在相垂直的另一个方向上就略弱于线偏振光的分辨率。圆偏振光PSF在xy平面关于焦点旋转对称,将得到比较好的成像质量。当入射激光的充溢系数βG越小的时候,显微镜的分辨率越好。根据共聚焦显微镜原理图搭建了LSCM光路,通过改变入射激光状态的方式,验证了影响共聚焦显微镜成像质量的这些因素,结果表明圆偏振光入射成像质量优于线偏振光入射;随着探测深度的增加,成像质量下降;考虑到图像的信噪比入射激光的充溢系数不是越小越好,而是大约在1附近时成像质量最好。
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