目的：　　肠道病毒（EV71）是引起手足口病的主要病原，尽管部分例症状轻微且自限性，但仍有部分患者因累及神经系统以及全身多脏器，而发展为重症而致死。虽然目前关于手足口病疫苗研发工作已逐渐开展，但 EV71重症感染致死率仍很高。有学者认为炎症介质相关的细胞因子风暴，儿茶酚胺过度释放、过度的神经系统炎症反应，最终引起神经系统损伤以及肺损伤。前期研究中我们通过对轻、重症手足口病与正常对照儿童的血清差异表达蛋白质谱分析研究，发现EV71感染的手足口病患儿血清中以血清淀粉样蛋白A（SAA）为主的、并与α2巨球蛋白（A2M）、转甲状腺素蛋白（TTR）、人血清淀粉样 P物质（SAP）组成的淀粉样变性蛋白网络异常表达，其中SAP上调表达约是正常组的1.5倍， A2M表达下调2倍左右。因此本课题通过建立EV71感染小鼠模型观察SAP与A2M和细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平的变化，以及观察肺组织病理改变，从而探索SAP和A2M与上述细胞因子的相关性，探讨SAP、A2M与细胞因子在脑和肺组织损伤中可能调控的机制，为预防和诊治重症手足口病引起肺和脑组织损伤提供实验参考。　　方法：　　1.建立动物模型以及分组　　无特定病原体（specific pathogen-free(SPF)）BALB/c小鼠12只，15d孕龄，产仔后母鼠哺乳喂养至2周龄，5-8只/窝，依据小鼠所在笼号将BALB/c乳鼠随机分组(实验组n=35，对照组n=29）。实验组腹腔注射1×107TCID50/ml的EV71病毒液0.1ml，进行EV71病毒感染，等量PBS液进行腹腔注射作为对照组。根据小鼠EV71感染后症状表现分为5期，第2天：精神反应期，活动减少；第3天：部分瘫痪期，运动不协调、前肢或后肢麻痹、弓背；全身瘫痪期，四肢瘫痪，濒临死亡；死亡期（第3-4天）；第10天仍存活，恢复期。分别于精神反应期、部分瘫痪期、全瘫痪期以及恢复期4个症状时期随机选择症状明显的小鼠6-8只进行称重后眼球采血处死，采集肺、脑组织备用，同一时点对照组小鼠（各6-8只）作为对照。　　2.检测指标及方法　　2.1小鼠一般情况　　观察实验组小鼠EV71感染后症状和对照组注射PBS后临床表现，密切观察乳鼠的精神反应、活动状态、皮疹、毛色、肢体活动（行走时后肢不协调，或左/右后肢不能活动或者后肢均无行动能力）及瘫痪等表现，记录乳鼠体重变化以及发病和死亡情况。　　2.2小鼠SAP和A2M指标　　采用酶联免疫双抗夹心法（ELISA法）测定感染小鼠和对照组在精神反应期、部分瘫痪期、全身瘫痪期、死亡、恢复期时肺和脑组织匀浆上清中SAP和A2M水平。　　2.3小鼠细胞因子水平　　采用 luminex液相芯片蛋白分析系统测定血清、肺组织和脑组织匀浆上清中因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平。　　2.4小鼠肺组织病理切片以及免疫组化观察　　3.统计学方法　　应用SPSS13.0统计软件对获得的数据进行统计学分析，计量数据以( x± s)表示。两组间均值比较采用 t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析，在多样本均数比较差异有统计学意义时进行均数的两两比较。如数据方差齐性，则采用LSD法分析组间差异，若方差不齐者，则采用Games-Howell法分析组间差异。通过Spearman秩相关检验计算变量之间的相关性（非参数数据）或皮尔森相关性检验（正态分布的数据），Rs>7.0提示高度相关，4.00.05），而在部分瘫痪期、全身瘫痪期、死亡期和恢复期各个时期的体重增长变化值与对照组比较均有统计学意义（p<0.05）。　　2. SAP和A2M水平变化　　2.1实验组在5个症状时期脑组织中SAP水平均与对照组差异有统计学意义（p<0.05），实验组脑组织SAP水平是对照组的2～9倍。实验组部分瘫痪期、全身瘫痪期和死亡期脑组织SAP水平均显著高于精神反应期（p<0.05）。　　实验组在5个症状时期肺组织中SAP水平均与对照组差异有统计学意义（p<0.05），肺组织SAP水平是对照组的1.5～8倍，肺组织SAP水平在部分瘫痪期、瘫痪期、死亡期均与精神反应期差异无统计学意义（p>0.05）；脑和肺组织恢复期SAP水平虽然均较精神反应期显著下降，但仍高于对照组水平。　　2.2实验组5个时期肺和脑组织中A2M水平表达量均与对照组具有统计学意义（P<0.05），但却没有明显规律性。　　实验组脑组织中A2M水平在不同时期表达量不同，但精神反应期、部分瘫痪期和全身瘫痪期无明显统计学意义（p>0.05），死亡期高于精神反应期（t=2.397，p=0.0337），但部分肢体瘫痪期、全瘫痪期和死亡期无统计学差异（p>0.05）。恢复期脑A2M水平较其他时期显著下降（t=3.3796，p=0.002），与对照组无明显统计学意义（t=1.482，p=0.1641）。　　实验组精神反应期、部分瘫痪期和全身瘫痪期肺组织A2M水平无统计学意义（p>0.05），恢复期肺组织A2M较精神反应期、部分瘫痪期和全瘫痪期均显著下降（t分别为3.865、3.874、3.341，p分别为0.002、0.0022、0.0059），但恢复期肺组织中A2M水平与死亡期却没有明显统计学意义（t=2.148，p=0.0548）。　　3.各组小鼠血清IL-6水平比较　　感染EV71病毒后小鼠血清中IL-6水平与对照组有统计学差异（p<0.05）。在感染后第2天（精神反应期）大约是对照组的100-300倍，而感染后第3天（部分瘫痪期、瘫痪期）大约是对照组20-30倍。在不同各个时期，实验组小鼠精神反应期IL-6水平明显高于部分瘫痪期、瘫痪期、恢复期并具有统计学意义（t分别为5.238、5.192、5.935，p分别为0.0002、0.0002、<0.0001）。　　4.脑组织中SAP/A2M水平与细胞因子的相关性分析　　在感染鼠脑组织中的SAP和A2M与血清IL-6水平无明显相关性（p>0.05）。　　在感染鼠脑组织中的SAP以及A2M与脑组织匀浆上清中的IL-6、TNF-ɑ和IL-1β水平均无明显相关性（p>0.05）。　　5.肺组织中SAP/A2M水平与细胞因子的相关性分析　　感染鼠肺组织SAP与血清IL-6水平呈明显正相关并具有统计学意义，相关系数0.621（p<0.001）。　　感染鼠肺组织 A2M与血清 IL-6水平呈显著意义的正相关，相关系数为0.403（p=0.033）。　　感染鼠肺组织SAP以及A2M与肺组织匀浆上清中的IL-6水平均无明显相关性（p>0.05）。　　感染鼠肺组织SAP与肺组织匀浆上清中的IL-1β和TNF-ɑ水平呈显著的负相关，相关系数分别为-0.426（p=0.024）和-0.638（p<0.001）。　　感染鼠肺组织A2M水平与肺组织匀浆上清中的IL-1β和TNF-ɑ水平呈显著的负相关，相关系数分别为-0.522（p=0.004）和-0.540（p=0.003）。　　6.肺组织病理　　感染鼠肺组织病理提示大量炎性细胞浸润，并且随着病情的加重，其肺泡结构破坏越明显，但肺组织中免疫组化提示EV71抗原阴性。　　结论：　　1.血清 IL-6在 EV71感染后小鼠精神反应期明显升高，提示血清 IL-6可能是EV71感染后早期可引起严重全身炎症反应。　　2.EV71感染鼠脑组织中的SAP以及A2M均高表达，并与脑组织匀浆上清中的IL-6、TNF-ɑ和IL-1β水平以及血清IL-6均无明显相关性，提示脑组织中的SAP以及A2M可能是EV71感染小鼠引起神经系统损伤的因素，其发挥着独立的调控作用。　　3.EV71感染鼠肺组织中的SAP明显高表达，并与血清IL-6水平明显正相关性，与肺组织匀浆上清中的IL-1β和TNF-ɑ水平呈显著的负相关，提示SAP是调控肺组织炎性因子血清IL-6，组织中IL-1β和TNF-ɑ水平的因素。　　4.EV71感染鼠肺组织中A2M水平在不同时期水平不同，但与血清IL-6水平呈明显正相关性，与肺组织匀浆上清中的IL-1β和TNF-ɑ水平呈显著的负相关，提示A2M是调控炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-ɑ水平的因素。　　5.感染组肺组织EV71抗原免疫组化阴性，而组织病理提示存在严重的肺损伤，提示EV71感染过程中严重的肺损伤并非直接由EV71病毒攻击导致。