目的(1)观察骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells ,BMSCs)在心肌梗死心脏组织中的迁移、分化。(2)观察BMSCs移植、新生鼠心肌细胞(Neonatal rat’s cardiomyocytes,NRCs)移植和BMSCs联合NRCs移植对大鼠心肌梗死的治疗效果。方法(1)BMSCs的分离、纯化、扩增、标记:取150±5g的雄性SD大鼠(SD ,Sprague Dawley)的长骨骨髓作供体,经密度梯度离心和贴壁筛选,培养、纯化、扩增BMSCs;收集第四代BMSCs,用CM-Dil荧光标记。(2) NRCs的分离、纯化:取出生1天的SD乳鼠,用胰酶消化和差速贴壁方法分离、纯化NRCs。(3)移植细胞悬液的制备:移植细胞数为2×106用PBS配成细胞悬液。(4)实验动物及分组:体重为(300±20g) SD大鼠44只随机分为四组:①对照组(C组,n=10):大鼠心肌梗死边缘两点、梗死区注射等量PBS(0.15 ml);②BMSCs移植组(M组,n=12):大鼠心肌梗死边缘两点、梗死区注射BMSCs (2×106 /0.15 ml);③NRCs移植组(N组,n=10):大鼠心肌梗死边缘两点、梗死区注射NRCs (2×106 /0.15 ml);④BMSCs+ NRCs组(MN组,n=12):大鼠心肌梗死边缘两点、梗死区注射BMSCs + NRCs (2×106 /0.15 ml,按1:1比例混合);(5)细胞移植:采用结扎左冠状动脉前降支的方法,建立大鼠心肌梗死模型。将移植细胞,在心梗区及心梗边缘直接注射移植;(6)术后喂养4周,行心脏彩超及左室血流动力学监测心功能,再取心脏组织,荧光显微镜观察BMSCs的迁移分布、分化及梗死区毛细血管密度。结果①采用密度梯度离心和贴壁筛选法分离、培养的BMSCs形态均一,增殖旺盛。分离、培养的NRCs生长良好,呈节律性跳动。②结扎左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死模型,心电图上有Q波形成、ST段抬高等心肌损伤表现,HE染色可见心肌梗死区病理表现为细胞坏死、炎性细胞浸润、纤维组织增生;③经细胞移植治疗的大鼠,心脏彩超、左室血流动力学监测心功能改善的结果:MN组、M组改善高于C组,MN组改善高于M组,射血分数EF值(%)(MN组47.81±3.61 vs M组44.41±2.45 vs C组40.52±2.61,P<0.05;N组43.64±3.81与其它组比较,P>0.05),左室压最大上升率+dp/dt(mmHg/s)(MN组3444.23±327.45 vs M组3167.26±266.98 vs C组2879.78±239.00, P<0.05;N组2976.85±108.85与其它组比较,P>0.05),最大下降率-dp/dt(mmHg/s)(MN组3156.60±297.73 vs M组2892.38±226.18 vs C组2060.60±281.40,P<0.05;N组2770.35±110.23与其它组比较,P>0.05)。④荧光显微镜下评价梗死区毛细血管密度:MN组、M组高于C组,MN组高于M组,毛细血管密度(个/HPF)(MN组5.73±1.47 vs M组3.93±0.91 vs C组2.04±0.87,P<0.05;N组3.10±1.11与其它组比较,P>0.05)。⑤免疫荧光染色观察BMSCs的分布分化:M组及MN组有CM-Dil阳性的细胞存在于梗死区分布,并可见CM-Dil和cTnT免疫组化染色双重阳性的细胞存在,证实在大鼠急性心肌梗死时相移植的BMSCs能在梗死区内存活并分化成心肌样细胞。结论①BMSCs可在心肌梗死的大鼠心脏存活、迁移分布,并能分化为心肌样细胞,促进血管新生,改善心功能。②BMSCs联合NRCs移植能进一步改善心梗区微环境增加心肌血管生成,改善心功能。