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人类乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科,至少有4种亚型:ayw、adr、ayr、和adw。其中adr亚型是中国人的主要流行株,其基因组DNA已被克隆,全长3.2kbp,与其他3种亚型在DNA水平和蛋白水平具有一定差异。HBV基因有4个开放阅读框(open reading frame,ORFs),其中编码外膜蛋白分子的同一阅读框被两个框内(in-frame)起始密码子分割为preS1、preS2和S。preS/S基因表达L蛋白,包含preS1、preS2和S。preS2-S基因表达M蛋白,包含preS2和S。目前,对中蛋白在乙型肝炎病毒生活周期中的功能及与其它乙型肝炎病毒蛋白间的相互作用尚不清楚。转基因技术是研究基因功能的理想方法。建立表达中蛋白的转基因小鼠将为中蛋白功能的研究提供理想的动物模型。 本研究采用已经构建了的含有CMV启动子和preS2-S基因(adr亚型)开放阅读框的preS2-S基因表达载体pcDNA3-S2-S,酶切鉴定证实载体构建成功,DNA测序证实插入的preS2-S基因序列与报道的序列一致。该载体转染入Hela细胞后,免疫细胞化学检测发现M蛋白可在Hela细胞的细胞质和/或细胞核中表达。将该载体经BglⅡ限制性内切酶线性化后,用原核显微注射法将其注射入受精卵雄原核,制备转基因小鼠,共得到23只存活的新生鼠。经PCR方法检测后获得5只Founder转基因小鼠,转基因整合率为21.7%(5/23),以抗HBs进行肝组织切片免疫组化检测,3只小鼠呈阳性,阳性率为60%,命名为C57-TgN(preS2-S/adr)SMMU。将该建立者小鼠与正常同系小鼠交配,获得14只小鼠,PCR检测发现8只阳性,阳性率为57.1%(8/14),将F1代PCR阳性鼠再和正常同系小鼠交配获得28只F2代小鼠,PCR检测发现6只阳性,阳性率为21.4%(6/28)。 上述结果表明,目的基因不但可以在转基因小鼠体内稳定地遗传,而且可以在转基因小鼠体内表达目的蛋白。该品系转基因小鼠的建立为研究乙型肝炎病毒中蛋白的功能及基于中蛋白的治疗性DNA疫苗提供了一个候选的动物实验模型。