基于PCR技术的木材腐朽菌快速鉴定方法的研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:yuji712
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近年来,我国的森林资源面临着严重的短缺问题,木材的供需矛盾日益尖锐。如何合理的利用和节省木材资源,是一个急需解决的问题,保证木材优越的质量显得尤为重要。在影响木材质量的众多因素中,由木材腐朽菌侵染木材而引起的木材腐朽现象十分常见。木材腐朽每年造成大量的木材资源流失,降低了木材的质量,严重影响木材的使用。为保护木材资源和合理地使用木材,人们对木材腐朽及木材腐朽菌作了广泛而深入的研究。目前鉴定木材腐朽菌的方法主要有两种,一种是传统的形态学鉴定方法,即通过观察菌落的宏观培养特性和微观培养特性的特征来对菌种进行鉴定和分类;另一种是近年来发展起来的分子水平的鉴定方法,即利用PCR技术快速鉴定出木材腐朽的病原菌。本文首先通过大量实验分别摸索出最适宜木材腐朽菌A、B生长的最适温度、pH值、光照强度、液体培养时摇晃转速。之后通过形态学鉴定方法,观察并记录两种木材腐朽菌菌落的生长率、菌落形状、菌落质地、菌落颜色、培养基的颜色变化以及菌落边缘菌丝的特征、培养基中主要菌丝的类型、产孢情况等,用传统的方法对两种木材腐朽菌进行鉴定,鉴别出了木材腐朽菌A为担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、栓菌属的真菌,木材腐朽菌B属于担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、多孔菌属。之后设计7组引物,优化PCR反应的条件,扩增已提取纯化的DNA,并将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,扩增产物回收后送检测序后,登录Genebank将测序产物与数据库中的DNA序列进行对比,确定木材腐朽菌A为Trametes versicolor (L) Lloyd.彩绒革盖菌,木材腐朽菌B属于多孔菌属真菌。最后对比形态学鉴定结果与基于PCR产物的分子生物学鉴定结果,两种鉴定方法得到的鉴定结果基本一致。通过分析得出结论:仅仅使用常规鉴定方法鉴别菌种,常易发生错误,结合分子鉴定技术可以使菌种的鉴别较为方便,结果更加准确;分子鉴定技术可为木材腐朽菌菌种鉴定提供分子水平上的依据,使用多组引物同时对菌种进行扩增,能更准去的测定待测样品的种系,但是对有疑问或有争议的菌种,应该结合菌种的菌丝和子实体形态特征及其生理生化特征,两种方法结合对比从而得到正确的分类结果。
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