研究背景： 登革病毒(Dengue virus，DENV)属黄病毒科、黄病毒属的一个血清学亚群，包括四个不同的血清型(DENV1～DENV4)，是能引起人类发生从自限性类似流感样综合症的登革热(dengue fever, DF)到严重威胁生命的登革出血热(Dengue hemorrhagic fever, DHF)及登革休克综合症(Dengue shock syndrome，DSS)的病原体。80年代以来，DHF/DSS在世界范围内的流行、爆发更加频繁，成为世界上最多见的虫媒病毒病。近年来，我国南方诸省亦频发该病毒的流行，已成为严重的公共卫生问题。虽然登革病毒感染在全世界范围内播散，但对登革热尤其DHF/DSS的确切发病机制仍未阐明，尚缺乏可用的疫苗和特效药物。 登革病毒为单正链RNA病毒，基因组编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。NS1蛋白是登革病毒非结构蛋白中唯一的糖蛋白，分子量约42～50KDa，常以二聚体形式存在，这种聚合体是维持其功能所必需的。近年研究表明，NS1蛋白在登革病毒致病与机体免疫反应中可能起重要作用，而且在登革病毒感染的诊断及亚单位疫苗的研制等方面也有一定的价值。 研究目的： 本文旨在研究重组DENV2-NS1蛋白的免疫原性，制备兔抗DENV2-NS1多克隆抗体；筛选和鉴定DENV2-NS1蛋白的B细胞优势表位，分析各表位的潜在应用前景，为进一步研究登革病毒NS1蛋白的生物学特性及其在DENV致病与免疫机制中的作用提供基础。 研究方法： 在本室已成功构建的登革病毒2型NS1蛋白毕赤酵母表达系统的基础上，利用该系统进行DENV2-NS1蛋白的分泌表达；并免疫新西兰大白兔，获得特异性针对DENV2-NS1的高免血清抗体，对抗体进行纯化；以纯化的多克隆抗体IgG作为靶分子对Ph.D.TM噬菌体展示肽库进行淘洗，再结合生物信息学方法，筛选DENV2-NS1蛋白特异性B细胞表位；人工合成表位多抗原肽(MAPs)，ELISA法检测其免疫反应性、敏感性及竞争抑制率。 结果： 1.转化子Pichia Pastoris—NS1经过复苏、诱导表达、鉴定和低温真空冻干，成功获得重组表达的DENV2-NS1蛋白冻干粉。 2.将重组表达的蛋白对新西兰大白兔进行免疫，经鉴定得到特异性针对DENV2-NS1的高免血清抗体，ELISA测定多克隆抗体的效价为1:6000。对抗体进行纯化，最终获得高度纯化的抗体IgG，纯化抗体的效价为1：100。 3.采用噬菌体表面展示技术，以抗DENV2-NS1多克隆抗体为筛选标靶，经过4轮生物淘洗，共筛选到7个DENV2-NS1蛋白B细胞表位VASPERPSPAFP、VASPERTSPAFP、EASPERPSPAFP、SSATPNRLTWLL、YSHVHALSTYAR、AAPLGTHPSMHP、LPPLGTHPSMHP，结合生物信息学分析，人工合成两条优势表位多抗原肽(MAPs) PESPSKLASA和AIKDNRAVHA，并用ELISA法对其免疫反应性、敏感性及竞争抑制率进行了初步检测。 结论： 重组表达的DENV2-NS1蛋白具有较强的免疫原性，成功获得特异性兔抗NS1多克隆抗体。筛选和鉴定了7个DENV2-NS1蛋白B细胞表位，为进一步研究登革病毒NS1蛋白及其抗体在登革病毒致病与免疫机制中的作用奠定了基础。