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猪精子和牛精子相比,在抗冷冻能力上存在较大的差异。冷冻造成了精子化学组成和结构的变化,其中蛋白质的变化被认为是影响精子冷冻效率的关键因素之一。本研究的主要目的是分析猪新鲜精子、猪冷冻精子和牛冷冻精子的蛋白质组学差异,初步探讨导致猪精子冷冻效果差的主导因素,在开发新型冷冻稀释剂和提高精子的冷冻质量等方面具有非常重要的指导作用。本研究以猪新鲜精液、猪冷冻精液和牛冷冻精液为实验材料,用长度7cm的IPG胶条(pH3-10)等电聚焦,用十二烷基磺酸钠凝胶电泳分离精子蛋白质,考马斯亮蓝R-250染色,PDQuest8.0软件检测分析差异蛋白质斑点并进行基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱分析,结果显示：冷冻过程中猪精子的质量发生了显著变化。猪冷冻精液的精子活力、活率和质膜完整率都极显著低于猪新鲜精液(P<0.01)。猪冷冻精液的精子活力、活率及质膜完整率均极显著的低于牛冷冻精液(P<0.01)。猪新鲜精子的蛋白质浓度显著高于猪冷冻精子的蛋白质浓度(P<0.05),牛冷冻精子蛋白质浓度显著高于猪新鲜精子和猪冷冻精子的蛋白质浓度(P<0.05)。牛冷冻精子蛋白质主要集中在10.16kD.25-28kD和75-150kD范围内,而猪冷冻精子和猪新鲜精子的蛋白质主要集中在10-16kD和25-75kD之间。这些表明,牛冷冻精子中含有较多的大分子蛋白质。猪冷冻精子的蛋白质更多集中在10-16kD之间；在25-75kD之间,猪新鲜精子蛋白质的含量要显著高于猪冷冻精子蛋白质(P<0.05)。猪新鲜精子和猪冷冻精子的蛋白质图谱经分析后得到9个差异蛋白点；猪新鲜精子和牛冷冻精子的蛋白质图谱经分析后得到15个差异蛋白点,猪冷冻精子和牛冷冻精子的蛋白质图谱经分析后得到4个差异蛋白点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱技术进行质谱分析,在质谱信息数据库搜索和识别出相应的5种蛋白质：线粒体F1-ATP合成酶或线粒体α-ATP合成酶,轴突的G蛋白调节诱导物1,顶体素结合蛋白,外周纤维蛋白2和苹果酸脱氢酶。与猪冷冻精子蛋白质相比,猪新鲜精子蛋白质中含有更多的线粒体F1-ATP合成酶或线粒体α-ATP合成酶、轴突的G蛋白调节诱导物1和顶体素结合蛋白；与猪新鲜精子蛋白质相比,牛冷冻精子蛋白质中含有更多的外周纤维蛋白2和苹果酸脱氢酶。研究表明：猪精子在冷冻-解冻过程中,猪精子蛋白质可能发生了降解或者丢失；猪新鲜精子(猪冷冻精子)和牛冷冻精子在蛋白质水平上存在差异。这些蛋白的差异可能会影响到猪精液的冷冻保存效果。研究结果为进一步研究猪精子蛋白质组学和精子冻伤机理提供了理论依据,在一定程度上揭示了猪精子冷冻质量差的原因。