论文部分内容阅读
目的:（1）通过分子对接技术预测矾冰纳米乳中白矾-冰片与血管生成、纤维增生的相关靶点;（2）通过实验验证矾冰纳米乳调控分子作用靶标影响烧伤创面愈合后纤维化和血管化。方法:第一部分:以白矾-冰片为研究对象,在Pharm Mapper在线服务器中反向分子对接获取其潜在靶点并打分,运用Discovery Studio 2016软件构图并进行分子正向对接验证其潜在靶点。第二部分:以SD大鼠深II°烧伤模型为研究对象,将72只SPF级SD大鼠随机数字表法分为分成6组,每组12只,即空白对照组;模型组;曲安奈德组;8.15mg/ml低剂量矾冰纳米乳组（8.15mg/ml低剂量组）;16.3mg/ml中剂量矾冰纳米乳组（16.3mg/ml中剂量组）;32.6mg/ml高剂量矾冰纳米乳组（32.6mg/ml高剂量组）。（除空白对照组外）连续给药35天。分别在第14、21、28、35天4个不同时间点采用空气栓塞法每组随机处死8只大鼠,采用HE染色计算成纤维细胞数密度;采用免疫组化法检测血红素加氧1（HO-1）的蛋白表达;采用RT-PCR检测HBB、ANG、UROS的表达。结果:第一部分:以白矾-冰片为研究对象,获取冰片主要成分为右旋龙脑,白矾主要成分为十二水合硫酸铝钾;在Pharm Mapper在线服务器中反向分子对接获取其潜在靶点并打分,运用Discovery Studio 2016软件构图并进行分子正向对接验证,右旋龙脑潜在靶点为ANG、HBB;白矾潜在靶点为UROS。第二部分:比较各组成纤维细胞数密度及HO-1、ANG、HBB、UROS表达。1.HE染色检测结果:与空白对照组比较,各个时间点模型组成纤维细胞密度逐渐升高,新生的血管成分增多（P＜0.05）,曲安奈德组第成纤维细胞数、血管成分明显减少,从第21d开始,中剂量组的成纤维细胞数密度低于曲安奈德组（P＜0.05）。2.RT-PCR检测结果:（1）与空白对照组比较,模型组各个时间点的表达量高于空白对照组（P＜0.05）;与模型组比较,曲安奈德组随着观察时间的推移,Ang1表达量逐渐降低（P＜0.05）。与模型组比较,各药物组Ang1表达量均低于模型组,具有较大组间差异（P＜0.05）;矾冰纳米乳中高剂量能够有效降低Ang1表达,且效果优于曲安奈德组与低剂量组。（2）模型组、曲安奈德、实验组HBB表达量均逐渐升高;但四组表达量与模型组、空白组无明显差异（P＞0.05）。（3）与空白组比较模型组UROS表达量逐渐升高（P＜0.05）;与模型组比较,曲安奈德组UROS表达量降低（P＜0.05）。21d、28d时与模型组比较,曲安奈德组、中剂量组UROS表达降低（P＜0.05）。中剂量组表达低于曲安奈德组（P＜0.05）。第28、35d各组比较:与模型组比较,各药物组UROS表达量均低于模型组,具有较大组间差异（P＜0.05）,表明矾冰纳米乳中剂量能够有效降低UROS表达,且效果优于曲安奈德组与低、高剂量组。3.免疫组化检测结果:与空白组比较,模型组HO-1的蛋白表达量呈逐渐上升趋势（P＜0.05）。与模型组比较,各个时间点曲安奈德组、不同剂量矾冰纳米乳组的蛋白表达量明显降低,具有较大组间差异（P＜0.05）。结论:1.通过分子对接预测ANG、HBB、UROS可能是抑制创面愈合后纤维化与血管化的潜在靶点。2.不同剂量矾冰纳米乳发挥抑制纤维化与血管化的作用靶点可能与其调控ANG与UROS、HO-1含量有关。