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目的:阐明紫花牡荆素(casticin,CAS)通过调控miR-139-5p的表达,从而抑制MHCC97-H源性肝癌干样细胞(liver cancer stem-like cells,LCSLCs)干性的机制。方法:1.球形成培养法从体外培养MHCC97-H细胞系获得球形成细胞用作MHCC97-H源性LCSLCs模型。分别采用流式细胞术、球形成试验、软琼脂集落形成试验、创口愈合实验、transwell小室侵袭实验、q RT-PCR和蛋白印迹分析MHCC97-H细胞和球形成细胞CD24+、CD44+、CD90+细胞百分率、自我更新能力、迁移和侵袭能力以及干细胞表面标志物CD24、CD44、CD90和干性相关因子ABCG2、Nanog、Ep CAM m RNA和蛋白表达水平。q RT-PCR检测L-02细胞、MHCC97-H细胞与LCSLCs miR-139-5p表达水平。2.分别利用miR-139-5p mimic(50 n M)或inhibitor(100 n M)转染LCSLCs操纵miR-139-5p表达水平,测定miR-139-5p对LCSLCs干性的作用。3.以DMSO为阴性(溶媒)对照、Apatinib(5.0μM)为阳性对照,用不同浓度的CAS(1.0、2.5、5.0μM)处理LCSLCs 24h以分析CAS对LCSLCs干性的影响。4.miR-139-5p mimic(50 n M)联合CAS(5.0μM)处理LCSLCs,检测两者合用对LCSLCs干性的影响。结果:1.与MHCC97-H细胞相比,MHCC97-H细胞系球形成细胞CD24+、CD44+、CD90+阳性率更高,球细胞体积更大且数量增多将近5倍,软琼脂集落数高5倍,迁移率高4倍,侵袭率高6.7倍,干细胞表面标志物CD24、CD44、CD90和干性相关因子ABCG2、Nanog、Ep CAM m RNA和蛋白表达水平更高,可以用作MHCC97-H源性LCSLCs模型;LCSLCs中miR-139-5p的表达水平显著低于其亲本细胞3.2倍和L-02细胞7倍(P<0.05)。2.miR-139-5p mimic转染使LCSLCs miR-139-5p的表达水平增加25倍,降低球形成率3.8倍及软琼脂集落形成率4.8倍,抑制迁移率3.3倍及侵袭率5.8倍,显著下调干细胞表面标志物CD24、CD44、CD90和干性相关因子ABCG2、Nanog、Ep CAM m RNA和蛋白表达水平(P<0.05)。3.miR-139-5p inhibitor转染使LCSLCs miR-139-5p的表达水平降低2倍,增加球形成率1.4倍及软琼脂集落形成率1.3倍,提高迁移率2.5倍及侵袭率2倍,上调干细胞表面标志物CD24、CD44、CD90和干性相关因子ABCG2、Nanog、Ep CAM m RNA和蛋白表达水平(P<0.05)。4.CAS和Apatinib以剂量依赖性方式优先抑制来自MHCC97-H细胞系的LCSLCs增殖;CAS以剂量依赖性方式降低LCSLCs球形成率和软琼脂集落形成率,抑制迁移率和侵袭率,下调干细胞表面标志物CD24、CD44、CD90和干性相关因子ABCG2、Nanog、Ep CAM m RNA和蛋白表达水平(P<0.05)。5.CAS以剂量依赖性方式上调LCSLCs miR-139-5p的表达水平;CAS联合miR-139-5p mimic转染能进一步降低LCSLCs球形成率和软琼脂集落形成率,抑制迁移率和侵袭率,下调干细胞表面标志物CD24、CD44、CD90和干性相关因子ABCG2、Nanog、Ep CAM m RNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论:CAS通过上调miR-139-5p表达从而抑制MHCC97-H源性LCSLCs干性特征。