杆状病毒载体介导钠碘转运体报告基因监测干细胞的实验研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dsq1980
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:探讨杆状病毒作为载体钠碘转运体(NIS)基因作为报告基因监测干细胞的可行性。   方法:通过Bac-to-Bac方法重组GFP及NIS杆状病毒(Bac–GFP 及Bac–NIS),以不同感染复数(MOI)的重组绿色荧光蛋白(GFP)基因杆状病毒(Bac-GFP)分别感染诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)、人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells, hESC)及骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs), 分别通过荧光显微镜及流式细胞仪测定干细胞的感染效率及荧光表达强度、荧光显微镜观察干细胞的荧光表达时间以及台盼蓝染色法检测重组杆状病毒对干细胞的毒性。通过重组NIS基因杆状病毒(Bac-NIS)感染BMSCs,观察不同MOI的Bac-NIS对干细胞摄125I的影响;Bac-NIS感染的干细胞不同时间摄125I和摄99mTcO4-功能的动态测定以及感染干细胞摄125I的高氯酸钠抑制实验;同时还进行了Bac–NIS感染的干细胞数量与细胞摄碘的相关性研究。   结果:成功制备了重组NIS和GFP基因的杆状病毒,受CMV(巨细胞病毒)立早期基因启动子调控。重组GFP杆状病毒MOI为200时,通过荧光显微镜观察iPS、hESC的感染效率大约为12%、27%;BMSCs的感染效率和荧光强度随Bac-GFP MOI的增加而增加,当MOI为200时,细胞感染效率和荧光强度达最高,感染效率为84.2%,而MOI为100时细胞的感染效率即达78%;当MOI为400时,细胞死亡数与对照组7天内未见明显差异;感染的BMSCs的荧光表达随着时间逐渐降低,第5d可见74.6%的细胞表达,第12d仍有34.2%的细胞表达。   Bac-NIS感染的BMSCs放射性125I摄取随着MOI的增加而增加,MOI=200时,细胞摄碘达最高;而且细胞摄取的碘可随高氯酸钠浓度的增加而明显抑制;细胞动态摄碘实验显示,感染细胞的125I摄取随着时间逐渐增加,30min达高峰,随后逐渐排出;而感染细胞摄取的放射性高锝酸根(99mTcO4-)同样随着时间逐渐增加,30min达高峰,但高峰时间较125I维持相对较长,为15-45min,且排出也相对较慢。   Bac-NIS感染的BMSCs数量与细胞放射性计数之间呈显著的相关性,R2=0.99,表明通过放射性计数变化可间接表明BMSCs的数量,为活体内示踪和定量干细胞提供依据。   结论:重组杆状病毒可感染人类胚胎干细胞和诱导性多潜能干细胞,对骨髓间充质干细胞具有较高的感染效率,细胞毒性低,具有较长的表达时间,可有效地介导放射性碘和高锝酸根的摄取,对干细胞移植治疗移行、分布和存活的监测具有可行性。
其他文献
人们常说这是一个看脸的时代,甚至将所有的成功归结于“颜值”。诚然,美丽的外表给人的第一印象会引人注目,但交往过程中,人就像一颗卷心菜,外表终究会被一层层剥落,留下里子与人看。所以,面子引人注目,但若没有“里子”,“面子”就成了“面具”。一个人只要灵魂足够高尚,满腹香气,定能在言谈举止中冲破皮囊,氤氲万里。  如今越来越多的人深陷“外在”的泥潭无法自拔,越来越多的人涌入整容机构,追求千篇一律的“美貌
期刊
目的:探讨研究布加综合征合并原发性肝癌的3.0T高场MRI影像学特点及可能影响因素。   方法:分析2009年07月至2011年02月在我院行MRI检查的128例布加综合征患者,其中19例患者
2005年3月28日,对于中国农业科学院油料作物研究所研究员李云昌来说,是一个十分难忘的日子。这一天,在庄严的人民大会堂,2004年全国科学技术奖励大会隆重举行,党和国家主要领
“双性化人格”指人的性格里既有男性特征也有女性特征,“中性化”概念侧重形象,两者存在分离与契合。电视选秀节目中的“中性化形象”包装,沦为赚取注意力获得收视率的手段
研究目的:  探讨结直肠癌肝转移(colorectal cancer with liver metastasis)患者行射频消融术(radiofrequency ablation)联合自体 DC疫苗(DC-RFA)与单纯 RFA治疗对比分析临床疗效
免疫应答的调控一直是免疫学领域的研究重点,其中负向免疫调控近年来尤其受到重视。调节性T细胞(regulatory T cells)的发现及其功能的阐明大大丰富了人们对免疫应答及免疫耐受
某些作物通过间作、套种或混种等形式合理搭配种植,往往可以控制或减轻病虫害的发生,从而收到“不施农药,胜施农药”的效果。本文介绍了一些作物优化配植的方法,供读者参考。
20世纪90年代以来,全球主权财富基金的数量和规模都迅速发展,主权财富基金已成为当今国际金融市场重要的参与者,其投资行为对一国宝贵的外汇资源财富以及国家整体战略发展产
据3月1日-3月7日一周的观察,国内玉米市场购销活动逐渐恢复正常,价格整体虽然仍处于弱势振荡调整之中,但受区域陛供需矛盾突出及政策性等因素影响,部分产销区行情差异化特征逐渐