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随着生命科学的发展,研究领域的不断开拓,越来越多的未知新基因和基因的新功能被发现,研究这些未知新基因的功能和已知基因的新功能成为了极其重要的一项内容。本实验应用RACE技术扩增本实验室构建的Long-SAGE标签库中的与乳腺发育相关功能Rpl11基因。使用SMARTTM RACE cDNA Ampliication Kit通过RT-PCR,将奶山羊乳腺组织中的mRNA反转录成cDNA,分别应用3′RACE和5′RACE扩增Rpl11基因的3′端和5′端。扩增产物TA克隆转化大肠杆菌,随机挑取阳性克隆后进行测序分析。通过序列比对、拼接,获得全长的Rpl11基因。对该序列进行生物信息学分析,Rpl11基因共编码246个氨基酸残基,氨基酸序列通过NCBI BLAST工具进行同源性分析,同源性最高的是Bos（Rpl11mRNA同源性为95%）,其次为Sus（Rpl11 mRNA同源性为93%）,再次为Hs（Rpl11 mRNA同源性为91%）。根据质粒介导的RNA干扰效应对Rpl11基因表达的抑制作用,研究基因功能。合成针对Rpl11基因的小发夹RNA表达载体,将shRNA表达载体和pIRES2-EGFP增强型绿荧光蛋白融合蛋白表达载体共转染奶山羊乳腺上皮细胞,针对无关序列的shRNA表达载体为阴性对照,荧光定量RT-PCR技术检测细胞Rpl11基因的抑制效果。特异性shRNA表达载体可以抑制Rpl11基因在乳腺上皮细胞中的表达,以及与乳腺发育相关激素受体Esr、Pgr基因的表达。实验结果表明,瞬时转染48h后,与阴性对照组相比,转染组Rpl11 mRNA表达量被显著抑制（p<0.05）,阴性对照组和空白对照组间差异不显著。稳定转染30d,转染组Rpl11 mRNA表达量也显著低于阴性照组（p<0.05）,阴性对照组和空白对照组间差异不显著（p>0.05）。应用PCR方法扩增Rpl11基因全长,在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入Rpl11基因,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-Rpl11。脂质体转染奶山羊乳腺上皮细胞,通过G418筛选出稳定转染的细胞株,确定了G418对乳腺上皮细胞的最小致死浓度为500μg/mL。应用荧光定量RT-PCR技术检测细胞Rpl11基因表达量,以及与乳腺发育相关激素Esr、Pgr基因的表达量变化,结果表明,瞬时转染48h后超表达组Rpl11 mRNA表达量极显著增加（p<0.05）,阴性对照组和空白对照组间差异不显著（p>0.05）。稳定转染30d后,超表达组Pgr、Esr mRNA表达量显著增加（p<0.05）,阴性对照组和空白对照组间差异不显著（p>0.05）。