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H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在中国、东南亚及世界许多国家分布广泛,中国大陆1994年首次公开报道从鸡群中分离到H9亚型AIV,随后便在一些地区形成小规模的流行,未波及全国。但1998年春夏开始的H9亚型禽流感在短短的几个月时间内就形成波及20多个省区的全国范围大流行,给我国的养禽业造成了巨大的经济损失。其对养禽业的严重危害性和公共卫生意义一直倍受学者们的关注。为研究H9N2亚型禽流感病毒传播途径的分子机制,本实验选择H9N2亚型AIV中国大陆早期分离株A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(简称SS株)和2001年流行时期的分离株A/Chicken/Shanghai/7/01(H9N2)(简称62株)为研究对象,对SS株进行内部基因全长序列测定和遗传进化分析同时比较了它和62株对4周龄SPF鸡的致病性。1 H9N2亚型禽感病毒SS株内部基因的序列分析选择H9N2亚型分离株A/Chicken/Guangdong/SS/94(C/GD/SS/94),根据已发表的序列和Hoffmann通用引物,设计扩增基因的引物对,提取基因组RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增6个片段并测序。所测序列与从GenBank中获取的部分H9N2亚型毒株的基因序列比较分析结果如下:C/GD/SS/94的所有内部基因与C/BJ/1/94的同源率均高,为95.7%～99.4%,说明该毒株与我国同期分离株C/BJ/1/94有共同的来源;与香港早期分离株C/HK/739/94相比,内部基因同源率为96.2%～99.3%,说明两者关系密切;与香港1997年活禽市场上流行的H9N2 AIV的代表株D/HK/Y280/94相比,各基因同源率均高,为96.8%～98.2%,说明它们之间在遗传演化地位上关系密切,同属于H9N2亚型AIV欧亚分支中的类C/BJ/1/94亚分支;与同期香港活禽市场上的另一流行株C/HK/G9/97相比,只有PB1基因同源性较低90.6%,其它基因同源性相对较高96.9%～98.5%。C/GD/SS/94与Q/HK/Gl/97内部基因同源性的范围在90.3%~95.7%。除M基因同源性略高为95.7%外,其他内部基因均在91.0%以下。而Q/HK/Gl/97与香港人感染H5N1和H9N2亚型AIV密切相关,它与1997年人源H5N1毒株HK/481/97的6个内部基因间同源率均达98%。C/GD/SS/94的6个基因均不在G1分支上。因此C/GD/SS/94不同于Q/HK/G1/97,与香港流感事件没有直接关系。其6个内部基因在进化树上与C/GD/5/97共处同一分支。通过内部全基因同源性比较可知,C/GD/SS/94与C/GD/5/97各个内部全基因同源性都达99.5%以上。说明C/GD/5/97内部基因很可能来源于C/GD/SS/94。2 H9N2亚型AIV对4周龄SPF鸡的致病性实验为研究H9N2亚型禽流感病毒的传播与复制特性,选用两株H9N2亚型AIV,在已知其中一株H9N2亚型AIV SS株的传播特性的基础上,以其为参照,通过比较两株H9N2亚型AIV在致病性方面的差异来推断62株的传播特性。将种毒经同一批10日龄SPF鸡胚扩增,收集含病毒的尿囊液,经HA和HI实验后,置于-70℃冰箱备用。接种前将种毒作1/10稀释后,按200μl/只的接种剂量,采用滴鼻、点眼和气管接种的方法对4周龄的SPF鸡进行致病性实验。接种后,注意观察鸡群,记录临床症状和发病情况,并分别在接种后的3、5、7、9、11天各组分别扑杀2只鸡。分别采取气管、肺、肾脏、小肠、肝脏、胰腺、脾脏等脏器,以10%中性福尔马林溶液固定;制作石蜡切片,部分经HE染色后在光学显微镜下直接观察病变;部分用免疫组织化学的方法,检测两株H9N2亚型AIV抗原的动态分布,免疫组化检测发现,SS株仅在肾脏能检测到抗原,而62株仅能从肺脏中检测到抗原。