乙肝病毒（hepatitis B Virus，HBV）感染是一种严重危害人类健康的传染性疾病之一，可引起人类急、慢性肝炎，甚至发展为肝硬化或肝细胞癌。目前临床上主要用核苷（酸）类药物发挥抗病毒作用治疗乙肝，如拉米夫定、恩替卡韦、阿德福韦酯和替诺福韦等。然而通过长期的临床治疗用药表明HBV易发生变异从而产生耐药现象，增加了对乙肝治疗的困难。因此，研究开发新的抗病毒药物特别是具有抗耐药乙肝病毒活性的药物是很有必要的。　　本课题分两部分进行，第一部分主要采用转染野生型HBV的HepG2细胞构建而成的HepG2.CW细胞株为筛选模型，分别采用CCK-8法、ELISA法和FQ-PCR法对CL系列54个新的化合物体外抗HBV活性进行初步研究，并从中筛选出具有低毒、高效的抗 HBV化合物；第二部分是采用拉米夫定耐药型HBV细胞HepG2.211和拉米夫定及恩替卡韦双耐药的HepG2.LER细胞株为体外研究模型，对化合物α-DDB-FNC体外抗耐药乙肝病毒的活性进行探讨。第一部分：CL系列54个化合物体外抗HBV活性初步筛选。[目的]从54个新型化合物中筛选出细胞毒性相对较低、具有较好的抗HBV活性的化合物。[方法]体外研究主要选用能够表达 HBV抗原标志物以及分泌 HBV颗粒的HepG2.CW细胞株为模型，恩替卡韦作为阳性对照。首先采用CCK-8法检测不同浓度的受试样品对细胞的毒性，再通过酶联免疫吸附法（ Enzyme Linked Immunosorbent Assay， ELISA）检测不同浓度的受试样品作用后第9天对HepG2.CW细胞上清中HBeAg和HBsAg分泌的抑制作用，对54个化合物进行初步研究，筛选出具有体外抗HBV活性的化合物，最后采用实时荧光定量PCR法检测初筛出的活性样品对细胞上清HBV DNA复制的影响，进一步评价样品抗HBV效果。[结果]（1）通过对CL001~CL042这42个化合物抗HBV活性的初步筛选，发现有7个样品能够较好地抑制HBV DNA的复制，然后检测筛选出的7个样品对细胞的毒性，发现化合物CL005和CL042具有较低的细胞毒性，细胞半数毒性浓度（CC50）均大于1000μM；这两个化合物在较低浓度下对第9天HepG2.CW细胞上清中抗原的分泌也具有一定的抑制作用，且化合物CL042抑制效果最好；另外，化合物CL005和CL042能够显著地抑制HepG2.CW细胞上清中HBV DNA的拷贝数，在浓度为1μM时，对第9天细胞上清中HBV DNA的抑制率均为98.60％，抑制效果随着样品浓度的增大而增强。（2）通过对CL049~CL060这12个化合物细胞毒性研究，发现CL051、CL052、CL053、CL055、CL058、CL059和CL060细胞毒性较低，CC50均大于1000μM；同时，化合物CL060对第9天细胞上清中抗原的分泌具有良好的抑制作用，在浓度为5μM对，化合物CL060对HBeAg的抑制率为22.10%，对HBsAg的抑制率为26.67%，且抑制作用与样品浓度之间呈正相关。[结论]通过对54个化合物的初步研究，筛选出9个细胞毒性相对较低的化合物，其中化合物CL005、CL042和CL060能够显著地抑制乙肝病毒HBeAg、HBsAg的分泌，且样品CL005和CL042对HepG2.CW细胞上清中HBV DNA的复制也具有显著的抑制效果，显示出良好的体外抗HBV活性，值得做进一步的研究。　　第二部分：核苷-联苯双酯化合物α-DDB-FNC体外抗耐药HBV活性的评价。[目的]化合物α-DDB-FNC，前期的实验研究已经表明该化合物体内外均具有良好的抗HBV活性。本次实验主要是针对化合物α-DDB-FNC抗耐药HBV的体外抑制作用进行研究。[方法]实验采用能够合成和分泌乙肝标志性抗原和病毒颗粒的拉米夫定耐药型 HBV细胞株 HepG2.211以及对拉米夫定和恩替卡韦双重耐药的HepG2.LER细胞株为实验模型。采用 MTT法检测化合物α-DDB-FNC对两种细胞的毒性作用；ELISA法检测样品作用后对细胞上清中 HBsAg和HBeAg表达的影响；FQ-PCR法检测样品对细胞上清和细胞内HBV DNA复制的影响，以此评价化合物α-DDB-FNC抗耐药 HBV活性。[结果]化合物α-DDB-FNC作用9天，结果显示α-DDB-FNC对两种耐药细胞产生的毒性具有一定的差异，对HepG2.211细胞具有较大的毒性，对HepG2.LER细胞毒性相对较低；对两种细胞上清中抗原的分泌均具有一定的抑制效果，且抑制作用具有时间和浓度依赖效应，同时对两种细胞HBV DNA复制的抑制作用也呈现出浓度依赖性。浓度为10μM时，化合物α-DDB-FNC对第9天HepG2.211细胞上清中 HBeAg和细胞内 HBV DNA的抑制率分别为33.48%和72.70%，对HepG2.211细胞内HBV DNA的半数抑制浓度（IC50）为5.39μM；对HepG2.LER细胞上清HBsAg和HBeAg的抑制率分别为34.27%和25.83%，对HepG2.LER细胞内外HBV DNA的抑制率分别为95.44%和81.88%，半数抑制浓度分别为3.02μM和1.60μM。[结论]化合物α-DDB-FNC能够有效的抑制耐药乙肝病毒的复制与表达，是一种具有发展前景的抗HBV新型化合物。　　第三部分：全文总结。概括本课题的研究成果及主要意义。　　第四部分：文献综述。概括介绍了临床常用的几种核苷酸类似物抗耐药乙肝病毒的研究现状，主要包括耐药乙肝病毒产生耐药突变的原因及其相关影响因素、常见耐药突变位点和发生耐药突变后处理方案等几个方面。