食品中奎诺酮类与合成对称二苯代乙烯类单克隆抗体的制备与应用

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兽药多用于治疗和预防动物疾病,其在食品中的残留已经对公众健康产生了影响。具有生长促进剂作用的非甾体对称二苯代乙烯类药物和具有抗菌作用的氟喹诺酮类药物在家畜中的滥用已经导致了动物源食品的激素和抗生素的残留。为了保护消费者,确保食品安全,必须对兽医化学残留物进行快速、有选择性和灵敏的检测。本文介绍了二苯代乙烯类药物与喹诺酮类单克隆抗体的制备和应用。己烷雌酚和两种氟喹诺酮(洛美沙星和培氟沙星)被选为半抗原。半抗原与匙孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)或鸡卵白蛋白(OVA)结合,用于合成免疫原,合成的免疫原使用了uv-vis分光光度计表征,用于为小鼠免疫。制备了一种抗己烷雌酚的单克隆抗体,合成HES-4C半抗原,与KLH偶联作为免疫原,并建立了间接竞争酶联免疫吸附法检测HES和DES,对己烷雌酚和己烯雌酚的半数抑制(IC50)分别为0.15 ng/m L和0.23 ng/m L。在牛奶样品添加回收试验中,两种人工合成的激素的回收率分别为60.48–102.19%(己烷雌酚)和89.34–100.16%(己烯雌酚)。在0.01 M的磷酸盐缓冲溶液中,免疫层析试纸条对己烷雌酚和己烯雌酚的消线值分别为0.5和1.0 ng/m L;在牛奶样品中,免疫层析试纸条对己烷雌酚和己烯雌酚的消线值分别为10ng/m L和15 ng/m L。新型洛美沙星免疫原(LFLX-EDEA-BSA)被设计制备洛美沙星抗体。在0.01 M的磷酸盐缓冲溶液中,间接竞争酶联免疫法对洛美沙星的检测限为0.04 ng/m L,半数抑制为0.19ng/m L。此抗体对只对两种喹诺酮类药物有明显交叉,其对诺氟沙星和依诺沙星的交叉反应率分别为111.8%和82.6%。检测磷酸盐缓冲液和牛奶样品中的洛美沙星的免疫层析试纸条方法的消线值分别为1和5.0 ng/m L。在最后一章中,我们制备了一种广谱抗培氟沙星的单克隆抗体,并在此基础上建立了检测鸡肉组织中9种喹诺酮类药物残留的间接竞争酶联免疫法和免疫层析试纸条方法。经过优化,此抗培氟沙星单克隆抗体对九种喹诺酮类药物存在交叉,其最低检测限为0.082ng/m L。在添加回收试验中,其在批内和批间的回收率分别为62.42-111.47%和63.5-113.79%。在磷酸盐缓冲液和食品样品中,免疫层析试纸条方法的消线值范围分别为2.5-50 ng/m L和5-100ng/m L。总的来说,本文成功制备了三种单克隆抗体,并在此三种单克隆抗体的基础上建立了间接竞争酶联免疫法和免疫层析试纸条方法。所开发的免疫系统检测的灵敏度,适用于常规监测和筛选二苯乙烯和氟喹诺类的重要残留物。
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