沙柳SpsFUCT基因的克隆、组织特异性表达及表达载体构建

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:radicafrank
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在植物中,核心岩藻糖基转移酶(FUCT全称为α-1,3-fucosyltransferase)通过N-糖基化修饰过程催化岩藻糖与N-聚糖相连,其产物核心岩藻糖继续发生糖基化修饰,参与植物激素调控、次生代谢、脱毒反应、信号转导等功能。FUCT是参与岩藻糖糖基化过程的重要酶,它通过影响岩藻糖糖基化修饰从而对植物的生长发育产生影响,涉及到分蘖角度变化及纤维素合成等方面。本研究以沙柳(Salix psammophila)为研究材料,根据红皮柳(Salix purpurea)岩藻糖基转移酶基因的CDS序列设计引物,通过PCR的方法,成功克隆了沙柳岩藻糖基转移酶基因的全长CDS序列,并命名为SpsFUCT。研究结果如下:1.同源克隆获得沙柳FUCT全长1569bp的CDS序列,编码522个氨基酸,分子量为58.74 KD,理论等电点为5.73。2.SpsFUCT蛋白质二级结构预测其为跨膜疏水性蛋白,含四个糖基化位点,不含信号肽。同源蛋白结构域、系统进化树结果表明,沙柳Sps FUCT与木本植物中的杞柳、毛果杨亲缘关系最近,蛋白结构域最相似;该蛋白属于Glyco-transf-10家族,具有GT10家族功能结构域。3.组织定量特异性表达分析说明SpsFUCT在植物各个组织中特异性表达,在成熟叶片中表达量最高,是叶腋的两倍,其木质部的表达量是幼茎的两倍。4.成功构建Sps FUCT的超量表达载体。研究结果表明成功克隆获得了沙柳Sps FUCT基因,该基因功能可能参与植物激素调控、次生代谢等生理生化过程,与植物分枝调控也可能有重要关联。本研究结果丰富了核心岩藻糖基转移酶的分子遗传学研究,为研究林木分枝角度和分枝方向及沙柳的分子育种研究与和应用提供了一定基础。
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