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目的:通过测定不同浓度、不同作用时间L-肉碱在体外对正常精液组和弱精症组精子活力、活率、膜完整性、线粒体膜电位以及精子凋亡的影响,评价其对男性不育症的治疗效果。
方法:根据WHO标准分类,选取50例正常精液和50例弱精子症精液。手淫法取得全份精液标本。将不同浓度(0.4mmol/L、4mmol/L、40mmol/L、400mmol/L)L-肉碱在体外分别与经处理的两组精子在37℃,5%CO2共同孵育,同时设立自身正常空白对照组,于40min、2h、24h时分别对它们运用计算机辅助精液分析(CASA)系统进行精液常规分析,观察精子运动参数变化;低渗肿胀(HOS)试验检测精子膜的完整性;另对孵育40min的各组利用荧光探针JC-1标记精子线粒体,在荧光分光光度计上检测JC-1荧光强度的变化;用TUNEL一步染色法,通过荧光显微镜检测精子细胞的凋亡情况。
结果:
1.与自身空白对照组相比,正常精液组与L-肉碱共同孵育后,在添加一定浓度后(0.4mmol/L-40mmol/L)不同作用时间精子活率、活力未见明显改变,无统计学意义(P>0.05);L-肉碱共同孵育对线粒体膜电位、精子凋亡率亦未见明显改变,无统计学意义(P>0.05);4mmol/L组在L-肉碱作用40min、24h时精子尾部肿胀率均明显升高,差异显著(P<0.05)。
2.与自身空白对照组相比,在相同条件下,弱精症4mmol/L组,不同孵育时间其精子活率、活力、膜完整性、线粒体膜电位均显著升高,精子凋亡率显著下降,有统计学差异(P<0.05)。
3.当L-肉碱添加浓度达到400mmol/L时,无论是正常精子组或弱精症组,精子活率、活力、膜完整性、线粒体膜电位均显著下降,精子凋亡率显著升高,有统计学差异(P<0.05)。
结论:
在精子的体外实验中:
1.对于弱精症患者,一定浓度的L-肉碱可提高人精子的活力、活率,提高膜的完整性,提高线粒体膜电位,使精子凋亡率下降;
2.对于正常精液,适当浓度L-肉碱可提高膜的完整性,但对精子活力、活率、线粒体膜电位、精子凋亡率无明显改变;
3.当L-肉碱添加浓度达到40mmol/L时,对人精子有毒性作用。
此实验为提高精子体外处理中的运动功能,对弱精症的治疗提供了一定的理论基础:其一,L-肉碱为脂肪酸氧化提供能量,提高精子运动能力;其二,L-肉碱可维持细胞膜的稳定,保持膜的完整性,提高精子的存活率;其三,L-肉碱可对抗氧化损伤,减少细胞凋亡。