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目的:观察益气化瘀方治疗膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)的临床疗效。在建立大鼠膝骨关节炎动物模型的基础上,应用益气化瘀方干预,探讨中医药治疗骨关节炎的作用机理。
方法:
1.临床试验研究:将符合入选标准的膝骨关节炎患者随机分为试验组和对照组,试验组40例予中药益气化瘀方治疗,对照组40例予莫比可治疗。用药后2周对患者WOMAC积分、中医全身证候积分进行统计分析。
2.动物实验研究:1月龄SD大鼠72只,随机分为正常对照组、模型组、益气化瘀方组和莫比可组,每组各18只。模型组,益气化瘀方组和莫比可组大鼠通过直立位诱导法建立大鼠膝骨关节炎模型。益气化瘀方组和莫比可组大鼠分别于5、7、9月龄(即造模术后4、6、8月)开始用药,连续用药1个月。分别在6、8、10月龄(即造模术后5、7、9月)处死4组大鼠各6只。处死大鼠后取膝关节,行番红O/固绿染色观察形态学变化,实时荧光定量RT-PCR检测各组关节软骨内Ⅱ型胶原基因(typeⅡcollagen gene,Col2A1)、聚集蛋白聚糖(aggrecan,Agcl)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)、金属蛋白酶类组织抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloprotease-1,TIMP-1)以及X型胶原基因(type Xcollagen gene,CollOA1)mRNA表达的情况。
结果:
1.临床试验研究:①用药后2周疾病总疗效评价:试验组的有效率82.5%,对照组的有效率87.5%。②用药后2周WOMAC积分评价:两组治疗前后自身比较均有改善,差异有统计学意义(P<0.01);对照组在疼痛积分、活动困难程度积分和WOMAC总积分改善优于试验组,差异有统计学意义(P<0.05)。③治疗后2周中医全身证候积分评价:试验组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。
2.动物实验研究:建立了一种新的大鼠膝骨关节炎模型,形态学分析显示造模术后模型组大鼠膝关节软骨结构破坏严重,出现特征性的退行性改变。实时荧光定量RT-PCR分析发现模型组大鼠膝关节软骨MMP13以及Co110A1 mRNA表达量高于正常组(P<0.01),Col2A1,Agcl以及TIMP-1 mRNA表达明显低于正常组(P<0.01)。而益气化瘀方组大鼠关节软骨退变表现较模型组明显减轻。实时荧光定量RT-PCR结果显示,益气化瘀方组大鼠膝关节软骨Col2A1、Agcl及TIMP-1mRNA表达量高于模型组和莫比可组(P<0.01,P<0.05),MMP-13及Coll0A1mRNA表达低于模型组和莫比可组(P<0.01)。
结论:临床试验研究初步表明益气化瘀方可缓解早期膝骨关节炎患者的临床症状,2周时临床疗效接近莫比可,全身症状改善优于莫比可。动物实验研究证明直立位负重法增加大鼠下肢关节应力,诱导加速膝骨关节炎病变的发展。益气化瘀方可通过上调关节软骨TIMP-1的表达量,抑制MMP-13和CollOA1的活性,促进软骨合成蛋白多糖与II型胶原,延缓膝骨关节炎大鼠关节软骨的退变。