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药物成瘾是一种原发慢性的神经精神疾病,伴随有基因、精神、环境等因素的影响。行为学表现包括以下一种或者更多的特征:对过量使用药物的控制能力的损害,强迫性的用药,药物造成机体伤害以后仍然继续用药以及精神上对药物的渴求。吗啡属于阿片类物质,是迄今为止最有效的镇痛药物之一,对多种癌症痛与慢性痛都有良好的效果。但是吗啡激活中脑边缘奖赏通路从而最终导致了成瘾,因此严重阻碍了吗啡在临床上的应用。
本论文中,采用吗啡自身给药大鼠模型,建立了成瘾过程中的各个阶段,即建立、消退、点燃、复吸阶段,同时建立了吗啡被动给药大鼠模型。通过成年大鼠脑片全细胞膜片钳技术,记录成瘾奖赏回路中重要核团伏核壳区的长时程抑制(LTD)和自发兴奋性突触后电流(sEPSC),发现:
(1)吗啡自身给药大鼠的对照、建立、消退、点燃各组,其伏核壳区的脑片都可以诱导发生LTD,并且在吗啡自身给药建立时增强,消退时减弱,点燃时再次增强。
(2)在吗啡被动给药过程中,对照、建立、消退各组大鼠伏核壳区脑片上都可以诱发产生LTD,对照组、被动建立组、消退组的LTD变化不明显,只有点燃组伏核壳区脑片LTD增强。
(3)在吗啡自身给药模型建立过程中,大鼠脑片伏核壳区的sEPSC也发生了明显的改变。吗啡自身给药建立、消退、能点燃与不能点燃组的sEPSC幅度均比对照组增大,不能点燃组比能点燃组sEPSC幅度大。sEPSC频率在吗啡自身给药建立、消退、能点燃和不能点燃组比对照组均显著减小,能点燃与不能点燃组未发现区别。吗啡自身给药建立、消退、能点燃组与不能点燃组sEPSC的Rise time与对照组均增大。与对照组相比,建立组、成功点燃组sEPSC的Rise50 time增大,不能点燃组减小,消退组不变,成功点燃组与不能点燃组的有明显差别。sEPSC的Halfwidth在建立时显著增大,成功点燃与不能点燃两组有差别。上升相斜率的数值与对照组相比其他组均减小。10-90 rise time建立、消退、成功点燃组均增大,不能点燃组不变。
(4)在吗啡被动给药的模型中,大鼠脑片伏核壳区的sEPSC的参数发生了明显的变化。与对照组相比,sEPSC幅度在建立、消退、点燃均增大。频率在建立、消退组减小,点燃组增大。Rise time,rise50 time,halfwidth以及衰减时间在建立、消退、点燃组均增大。上升相斜率数值在建立、消退组均增大,在点燃组减小。10-90 rise time在建立、消退组减小,点燃组增大。
(5)根据自身给药点燃组大鼠对于单次静脉注射吗啡(5mg/kg)行为学表现不同,分成了成功点燃组与不能点燃组。成功点燃组与不能点燃组大鼠伏核壳区的LTD是不同的,成功点燃组大鼠LTD明显增强,而不能点燃组大鼠LTD与对照相比没有明显差异,提示成功点燃组大鼠伏核壳区发生明显的可塑性变化。
(6)成功点燃组与不能点燃组大鼠伏核壳区部位的蛋白的SDS-PAGE电泳的蛋白带型在110 KD分子量部位的蛋白表达不同,不能点燃组大鼠比成功点燃组大鼠明显增强了110KD的蛋白带。经过蛋白质谱分析证实,伏核壳区110KD蛋白条带主要组成部分是蛋白K,B,N三种重要的调节蛋白,其中K是一种限速酶。这个带型组分还有AP-2,ABC蛋白复合体等与突触部位膜泡运输相关的调节蛋白。此外发现了一个重要的蛋白S,它出现在点燃组110KD蛋白条带。
(7)通过Western-blot方法,发现不能点燃组大鼠伏核壳区GluR1与GluR2的含量明显高于成功点燃组,而ser845位点磷酸化的GluR1和CaMKⅡ alpha亚基在两组大鼠中未发现统计差异。
以上实验结果为研究药物成瘾的神经机制提供了新的资料,为治疗阿片成瘾及戒毒提供了新的思路。