ICC/RT—PCR半定量分析法检测甲型肝炎病毒(HAV)减毒活疫苗感染性滴度的研究

来源 :中国协和医科大学 中国医学科学院 北京协和医学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dacong966963
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  本研究对快速检测甲肝病毒减毒活疫苗感染性滴度方法的建立进行了探索。我们采用联合细胞培养和分子生物学技术建立了以细胞培养/逆转录聚合酶链式反应(Integratedcellculture/reversetranscriptase-polymerasechainreaction;ICC/RT-PCR)及凝胶扫描半定量分析来检测甲肝减毒活疫苗滴度,并与LgCCID50法的结果作了比较,建立了一种快速、灵敏、特异地检测甲肝病毒减毒活疫苗感染性滴度的方法。ICC/RT-PCR法结合了细胞培养法与分子生物学方法的优点,可将疫苗感染性滴度的检测时间由LgCCID50法的一个月左右缩短到1周左右。感染性甲肝病毒滴度为7.50LgCCID50/ml的甲肝病毒疫苗参考品经ICC/RT-PCR半定量分析法在第4天后检测到的滴度为7.67,而经灭活的参考品在10。稀释度未产生阳性结果,表明该法有着较好的灵敏度和特异性。用该法检测疫苗样品,在培养时间为4天的结果与目前常用的细胞培养法(LgCCID50)检测结果相近。ICC/RT-PCR法应用于HAV减毒活疫苗感染性滴度的检测具有灵敏、特异、快速的优点,具有作为检测HAV减毒活疫苗感染性滴度的常规方法的应用潜力。
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