目的：　　1.分离提取出足量、稳定的大鼠骨髓源内皮祖细胞（EPCs），为进一步探索黄芪、丹参、当归含药血清配伍及单味药对EPCs生物学功能的影响做准备；　　2.从体外细胞实验角度，明确黄芪丹参配伍含药血清对大鼠骨髓源EPCs增殖、迁移、黏附和形成管状结构功能的影响，为黄芪丹参配伍使用以及益气活血法的应用提供理论依据，也为进一步阐明益气活血法对EPCs参与血管新生作用的影响机制研究提供参考。　　方法：　　1.EPCs的分离、培养　　采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离出单个核细胞，然后用差速贴壁法纯化细胞。用加入了多种细胞因子的EGM-2培养液诱导培养，置于5%CO2、37℃、饱和湿度的培养箱中孵育。实验过程中所用细胞为培养7天的原代细胞。　　2.EPCs的鉴定　　（1）形态学观察：倒置相差显微镜下观察细胞的形态及生长状态。　　（2）细胞表型鉴定：取培养7天的原代细胞，用流式细胞仪鉴定细胞表面抗原CD34、CD133和VEGFR-2。一抗分别为羊抗大鼠CD34抗体、兔抗大鼠CD133抗体和兔抗大鼠VEGFR-2抗体，二抗分别为FITC标记的羊抗兔IgG和兔抗羊IgG。　　3.制备含药血清及实验分组　　将中药饮片浸泡、煎煮、过滤并浓缩至预定浓度后灭菌备用，用灌胃法给大鼠给药，每日两次，连续给药4天后通过心脏取血，分离出含药血清灭活除菌。实验分为6个组：黄芪组、丹参组、当归组、黄芪丹参配伍组、黄芪当归配伍组及空白对照组。　　4.EPCs功能的检测　　（1）EPCs增殖功能的检测：消化收集培养7天生长良好的原代细胞，以2.5×103个/孔接种于96孔培养板中，待细胞贴壁后加入含药血清培养，分别在含药血清作用24小时、48小时、72小时时采用MTT比色法检测细胞的增殖情况。　　（2）EPCs迁移功能的检测：用Transwell小室法进行迁移实验，下室分别加入含药血清，上室分别以5×104个/孔接种培养7天生长良好的原代细胞，含药血清作用24小时后用结晶紫将迁移过膜的细胞进行染色，倒置显微镜下观察迁移细胞数量并拍照。　　（3）EPCs黏附功能的检测：用基质胶制备人工基底膜，将培养7天生长良好的原代细胞以4×103个/孔接种于铺有人工基底膜胶的96孔培养板上培养，含药血清作用6小时后洗去未黏附细胞，用MTT法检测各组黏附细胞量。　　（4）EPCs管状结构形成功能的检测：将培养7天生长良好的原代细胞以2×105个/孔接种于提前铺入Matrigel胶的24孔培养板上，含药血清作用6小时后，倒置显微镜下观察各组细胞的管状结构形成情况并拍照，用image J测量管状结构长度。　　5.统计学处理　　实验数据采用SPSS17.0统计分析软件进行单因素方差分析，P﹤0.05为差异有统计学意义。　　结果：　　1.EPCs的培养与鉴定　　分离培养24小时后的原代细胞大部分呈小圆形，尚未贴壁；培养3天后，EPCs均已贴壁，多为梭形或纺锤形；培养4天后贴壁细胞数量增多，细胞开始明显增殖；培养7天后可见大量细胞集落形成，细胞增殖旺盛；培养10天到14天后细胞集落逐渐融合成片，呈典型的铺路石样形态。原代培养7天的EPCs表面抗原CD34表达率为39.51%，CD133表达率为23.75%，VEGFR-2表达率为17.75%，表明所分离培养的细胞为EPCs。　　2.各组含药血清对EPCs功能的影响　　（1）各组含药血清对EPCs增殖功能的影响　　含药血清处理细胞24小时后检测结果显示，黄芪丹参配伍组细胞增殖能力最强，与黄芪组、丹参组、当归组、空白对照组相比差异有统计意义（P﹤0.05）；药物作用48小时、72小时后检测结果显示，黄芪丹参配伍组细胞增殖能力最强，与其它各组相比差异均具有统计意义（P﹤0.05）。　　（2）各组含药血清对EPCs迁移功能的影响　　含药血清处理细胞24小时后结果显示，黄芪丹参配伍组迁移过膜的细胞个数最多，与黄芪组、丹参组、当归组、黄芪当归配伍组和空白对照组相比，差异均具有统计意义（P﹤0.05）。　　（3）各组含药血清对EPCs黏附功能的影响　　含药血清处理细胞6小时后检测结果显示，黄芪丹参配伍组黏附细胞数量最多，与黄芪组、丹参组、当归组和空白对照组相比，差异均具有统计意义（P﹤0.05）。　　（4）各组含药血清对EPCs管状结构形成功能的影响　　含药血清处理细胞6小时后结果显示，黄芪丹参配伍组形成管状结构长度最长，与黄芪组、丹参组、当归组、空白对照组相比，差异均具有统计意义（P﹤0.05）。　　结论：　　1．体外培养大鼠骨髓源性EPCs具有增殖、迁移、黏附和形成管状结构的功能；　　2．黄芪、丹参、当归、黄芪丹参配伍、黄芪当归配伍含药血清均具有改善体外培养骨髓源性EPCs的增殖、迁移、黏附和管状结构形成能力的作用；　　3．黄芪丹参配伍含药血清比黄芪、丹参、当归单味药和黄芪当归配伍含药血清能更显著的提高EPCs的增殖、迁移、黏附和管状结构形成能力，黄芪和丹参中的某些活性成分在提高 EPCs生物学功能的过程中可能具有协同作用，益气活血法对改善 EPCs的生物学功能具有重要作用。