油松雌配子体败育时期球果蛋白质的变异研究

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该研究以辽宁兴城油松种子园中油松28号雌性不育系的雌球果为研究材料,应用当前蛋白质分析的先进技术较为系统地研究了油松雌配子体发育关键时期的同工酶和蛋白质的变化.为油松雌性不育分子生物学机制的研究奠定了良好的基础.用聚丙烯酰胺凝胶电泳比较分析了28号不育系和可育系的过氧化物酶同工酶(POD isoenzyme)谱的变化规律.实验证明,在雌配子体败育前后不育系POD同工酶的活性变化比可育系的明显;不育系存在Rf值分别为0.39、0.77两条稳定的特异谱带,Rf值为0.56的谱带表达量明显低于可育系.结果表明,不育系中与POD有关的代谢过程可能发生了异常变化,这种变化可能与游离核的有丝分裂停止有关.Rf值为0.39和0.77的两条特异谱带的出现表明不育系可能发生了基因水平的突变,因此该谱带可以作为不育系的同工酶标志.用SDS-PAGE分析了28号不育系与14号可育系球果蛋白质多肽的变化.证明不育系存在分子量为18.7kD的特异蛋白质;另外一些蛋白质的表达量也存在变异,如分子量为38.3kD的蛋白质表达量明显低于可育系的,分子量为26kD的蛋白质表达量则高于可育系的,表明不育系基因表达调控发生了变异.建立了IPGphor-EttanDALT双向电泳系统分析油松雌球果全蛋白质2-D图谱的技术体系,并分析了不育系(28-1)与可育系(15-1)的蛋白质多肽变化.从油松球果蛋白质2-D图谱上分别检测到410~517个多肽点,存在A、B、C三个明显的变异区,其蛋白质的数量与表达量在可育系与不育系间存在明显差异.败育前二者之间的蛋白质谱中共有28个差异点,其中15个只在不育系中表达,13个只在可育系中表达;同时有7个蛋白质多肽的表达量存在差异,不育系中有4个表达量高,3个表达量低.败育后,二者蛋白质谱中共有16个差异点,各有8个;有11个多肽点的表达量存在差异,其中不育系有7个表达量高,有4个表达量低.以上特点表明不育系中不仅存在单个基因的变异,同时可能存在成组相关基因的变异或异常调控作用,这些变化与油松的雌性不育有密切的关系.另外,尝试用毛细管电泳(CE)技术分析了油松雌球果中的水溶性蛋白质.初步建立了油松雌球果水溶性蛋白质的毛细管电泳分析技术,并简要分析了关键期内油松可育系与不育系间水溶性蛋白质的变化.
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