论文部分内容阅读
第一部分SEMG1、SEPT12基因的表达分析目的:检测精囊凝胶蛋白1(SEMG1)、胞裂蛋白12(SEPT12)基因在弱精子症(Asthenozoospermia,AZS)患者和正常对照精子中m RNA的表达,分析SEMG1、SEPT12基因与弱精子症的相关性。方法:收集成年男性正常对照组和弱精子症组精液样本各40例,采用Percoll密度梯度分离液纯化精子,提取精子RNA并将其逆转录为c DNA。采用实时定量RT-PCR(q RT-PCR)的方法,分别以对照组和弱精子症组精子的c DNA为模板,设计SEMG1、SEPT12基因的特异性扩增引物进行PCR扩增,比较两组精子中SEMG1、SEPT12基因m RNA表达差异。结果:通过qRT-PCR进行目的基因和内参基因的扩增,分别获得特异性扩增条带,SEMG1目的基因片段为163bp,SEPT12目的基因片段为167bp,内参基因GAPDH目的片段为189bp。对两样本组目的基因的相对表达量采用独立样本t检验分别进行统计分析。结果显示:1.AZS组SEMG1基因的m RNA表达水平(1.98±0.24)显著高于对照组(1.05±0.35),差异具有统计学意义(P<0.05);2.AZS组SEPT12基因的m RNA表达水平(0.36±0.14)显著低于对照组(1.03±0.25),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.精囊凝胶蛋白1基因(SEMG1)在弱精子症精子中表达上调,可能与AZS的发生有关;2.胞裂蛋白12基因(SEPT12)在弱精子症精子中表达显著降低,可能参与AZS的发生。第二部分SEMG1、SEPT12基因的多态性研究目的:应用KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR)高通量SNP(Single nucleotide polymorphism)检测技术对SEMG1基因的rs16989820位点、rs2301366位点,及SEPT12基因的rs759991位点、rs6500634位点进行检测,初步探讨这四个位点的多态性与河南弱精子症患者的相关性,为弱精子症的诊断和治疗提供相关的理论依据。方法:收集276例正常成年男性精液样本作为对照组,276例弱精子症患者精液样本作为病例组,提取精子基因组DNA,通过KASP高通量SNP检测技术对SEMG1基因的rs16989820位点、rs2301366位点,及SEPT12基因的rs759991位点、rs6500634位点进行基因分型。随机选取各位点不同基因型个体的PCR扩增产物进行DNA测序验证。结果:1.SEMG1基因的rs16989820位点、rs2301366位点和SEPT12基因的rs759991位点、rs6500634位点在弱精子症组和对照组中的基因型分布频率符合Hardy-Weinberg平衡(P值均大于0.05),表明样本具有良好的人群代表性;2.SEMG1基因的rs16989820位点和rs2301366位点其等位基因和基因型频率在对照组和弱精子症组分布差异均无统计学意义(P>0.05);3.SEPT12基因rs759991位点在弱精子症组和对照组间的等位基因和基因型频率分布差异显著,具有统计学意义(P<0.05),携带T等位基因和TT基因型个体发生弱精子症的风险增高(P=0.007,OR=1.413,95%CI:1.098-1.818;P=0.021,OR=1.891,95%CI:1.097-3.261);4.SEPT12基因rs6500634位点在弱精子症组和对照组间T等位基因频率分布差异显著,具有统计学意义,携带T等位基因的个体发生弱精子症的风险降低(P=0.030,OR=0.661,95%CI:0.454-0.963);5.SEPT12基因rs759991和rs6500634位点的单倍型结果显示,携带C-T单倍型的个体可降低弱精子症的发生风险(P=0.006,OR=0.431,95%CI:0.233-0.798),而携带T-C单倍型的个体可增加弱精子症的发生风险(P=0.002,OR=1.549,95%CI:1.180-2.033)。结论:1.SEPT12基因rs759991位点T等位基因和TT基因型可能是河南汉族人群弱精子症的遗传危险因子,可增加弱精子症的发生风险;2.SEPT12基因rs6500634位点T等位基因可能是河南汉族人群弱精子症的遗传保护因子,可降低弱精子症的发生风险;3.SEPT12基因rs759991和rs6500634位点的C-T单倍型可能是弱精子症的保护单倍型,而T-C单倍型可能是弱精子症的风险单倍型。