鞭毛主调控基因flhDC过表达致死与细菌类凋亡的相关性研究

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为探索过表达鼠伤寒沙门氏菌鞭毛主调控基因flhDC(flhDCSTM)致死大肠杆菌DH31soplacI与类凋亡的关系,本研究设计检测含重组表达载体pN15E6-flhDCSTM的大肠杆菌DH31soplacI的生长情况,通过测定IPTG诱导后的pN15E6-flhDCSTM重组大肠杆菌的生长曲线和菌落数,以及通过单独过表达flhDSTM和flhCSTM验证flhDCSTM基因过表达致死大肠杆菌DH31soplacI。构建含lacZ报告基因和PlexA,PfhuF,PmreB启动子片段的融合表达载体pMdXlacZ-T-PlexA、pMdXlacZ-T-PfhuF和pMdXlacZ-T-PmreB,通过β半乳糖苷酶活性测定过表达flhDCSTM与lexA,fhuF,mreB表达调控状况。将含pN15E6-flhDCSTM质粒的菌株,经IPTG诱导和诺氟沙星处理后通过DCHF-DA染色法检测细胞内活性氧(ROS)变化,应用DiBC4(3)染色法检测细胞膜电位变化来探究过表达flhDCSTM致死大肠杆菌与诺氟沙星以类凋亡方式致死大肠杆菌的相关性。结果显示flhDSTM和flhCSTM同时表达是致死宿主菌的原因,这种致死宿主现象在液体培养时也同样存在。在过表达flhDCSTM的条件下,含pMdXlacZ-T-PmreB和pMdXlacZ-T-PfhuF的菌株半乳糖苷酶(LacZ)表达量显著上调,含pMdXlacZ-T-PlexA菌株LacZ表达量在过表达flhDCSTM条件下变化不明显,说明过表达flhDCSTM显著上调PmreB和PfhuF启动子活性。过表达flhDCSTM基因的菌株ROS水平明显增高,并且检测到细胞膜去极化特征,这表明过表达flhDCSTM基因致死DH31soplacI可能与ROS显著增高有关,并由此出现细胞膜去极化结果,从这个方面看与细菌类凋亡具有相似性。本研究说明过表达flhDCSTM致死大肠杆菌的途径可能与铁调控有关,并且致死特征与类凋亡具有相似性。
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