黑素瘤是一种具有高度侵袭性的肿瘤,容易发生转移。趋化因子及其受体与黑素瘤的进展有密切关系。其中趋化因子CXCL12(C-X-C motif chemokine ligand 12)及其受体CXCR4 (C-X-C chemokine receptor type 4)、CXCR7 (C-X-C chemokine receptor type 7)所构成的CXCL12/CXCR4、CXCL12/CXCR7生物轴均参与了黑素瘤的进展过程。但是,CXCL12/CXCR4、CXCL12/CXCR7生物轴在黑素瘤进展中的作用存在不同意见。本研究以CXCR4.CXCR7.CXCL12为研究对象,检测CXCR4和CXCR7在皮肤黑素瘤的表达情况,研究CXCL12/CXCR4和CXCL12/CXCR7生物轴对人黑素瘤细胞株M14生物学行为的影响,深入探讨黑素瘤发病机制,为黑素瘤的临床治疗提供理论基础和实验依据。第一部分CXCR4、CXCR7在皮肤黑素瘤、色素痣组织中的表达及其意义目的探讨皮肤黑素瘤、色素痣组织中趋化因子受体CXCR4和趋化因子受体CXCR7的表达及其与黑素瘤临床病理学特征指标的相关性。方法 应用免疫组织化学法检测CXCR4、CXCR7在40例皮肤黑素瘤组织及40例色素痣组织中的表达情况。结果免疫组织化学法结果显示,在40例皮肤黑素瘤和40例色素痣组织标本中,CXCR4的表达情况分别为：(-)：20%(8/40)和50%(20/40),(+)：12.5%(5/40)和42.5%(17/40),(++)：32.5%(13/40)和7.5%(3/40),(+++)：35%(14/40)和0%(0/40),差异均具有统计学意义(P<0.05),CXCR7的表达情况分别为：(-)：15%(6/40)和35%(14/40),(+)：10%(4/40)和62.5%(25/40),(++)：22.5%(9/40)和2.5%(1/40),(+++)：52.5%(21/40)和0%(0/40),差异均具有统计学意义(P<0.05)。在40例皮肤黑素瘤组织标本中,CXCR4与CXCR7的表达水平一致性较差；在40例色素痣组织标本中,CXCR4与CXCR7的表达水平一致性一般,Kappa值均具有统计学意义(P<0.001)。CXCR4的表达水平在年龄、性别、Breslow厚度、溃疡情况、淋巴细胞浸润情况分组中无显著差异(P>0.05),在发病部位、Clark分级、淋巴结转移分组中存在显著性差异(P<0.05),CXCR7的表达水平在年龄、性别、溃疡情况、淋巴细胞浸润情况、淋巴结转移分组中无显著差异(P>0.05),在发病部位、Breslow厚度、Clark分级分组中存在显著性差异(P<0.05)。结论CXCR4和CXCR7在黑素瘤组织标本中呈中、高表达,在色素痣组织标本中呈阴性或低表达,CXCR4和CXCR7的表达水平可能没有明显的相关性,但可能与黑素瘤的肿瘤进展及预后相关。第二部分CXCL12对人黑素瘤细胞株M14生物学行为的影响目的探讨趋化因子CXCL12对人黑素瘤细胞株M14细胞体外增殖、迁移、侵袭的影响。方法Real-time PCR法和Western Blot法检测人黑素瘤细胞株A375、M14, MV3中趋化因子受体CXCR4和趋化因子受体CXCR7的表达。用不同浓度的CXCL12 (0、10、50、100、200ng/ml)刺激或诱导人黑素瘤细胞株M14, CCK8法检测细胞增殖,Transwell迁移和侵袭试验检测细胞迁移和侵袭能力。用100ng/ml的CXCL12处理人黑素瘤细胞株M14, Western blot法检测处理后不同时间点(0、 5、10、20、30、60min)的ERK、p-ERK、AKT、p-AKT的表达。结果10、50、100、200ng/ml浓度的CXCL12均能增强人黑素瘤细胞株M14细胞的增殖能力、迁移能力,而50、100、200ng/ml浓度的CXCL12能增强人黑素瘤细胞株M14细胞的侵袭能力,且随着浓度的增加,其促进细胞增殖、迁移及侵袭的作用更加明显。但是,100ng/ml与200ng/ml浓度的CXCL12诱导细胞增殖及迁移的数量统计学上无明显差异。100ng/ml浓度的CXCL12具有促进ERK、AKT信号通路激活的效果。结论CXCL12能够增强人黑素瘤细胞株M14细胞的体外增殖、迁移、侵袭能力,激活ERK、AKT信号通路,CXCL12可能与黑素瘤的进展过程相关。第三部分siRNA干扰CXCR4、CXCR7表达后对人黑素瘤细胞株M14生物学行为的影响目的探讨CXCL12/CXCR4和CXCL12/CXCR7生物轴对人黑素瘤细胞株M14增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制。方法利用小于扰RNA(small interfering RNA, siRNA)沉默CXCR4和(或)CXCR7在人黑素瘤细胞株M14细胞的表达,应用Q-PCR及Western Blot法检测沉默效果。转染siRNA后,通过CCK8试验检测细胞增殖,Transwell迁移与侵袭试验检测细胞迁移、侵袭能力,Western Blot法检测ERK、p-ERK、AKT、p-AKT的表达。结果CXCR4和CXCR7的干扰效果在mRNA和蛋白水平上得到验证,分别干扰CXCR4和CXCR7的表达,或同时干扰CXCR4和CXCR7的表达,均能抑制人黑素瘤细胞株M14细胞的增殖、迁移、侵袭能力,以及减少p-ERK、p-AKT的相对表达量。结论CXCL12/CXCR4生物轴及CXCL12/CXCR7生物轴不同程度地共同参与了黑素瘤的增殖、侵袭、迁移过程,而且可能与ERK、AKT信号通路的激活相关。