前言：肾细胞癌是成人肾脏病变中最常见的一种恶性肿瘤，约占全身肿瘤的2％—3％。因为先天性多药耐药，肾细胞癌对蒽环类、长春花碱类、及其它抗肿瘤药物均不敏感。肾细胞癌的多药耐药性是由多药耐药基因（mdr1）编码的多药耐药蛋白（P-glycoprotein，P-gp）过度表达所致。目前发现的P-gp抑制剂由于较大的毒付作用而难以应用于临床。因此，应当寻找更为有效而低毒的逆转方法来克服肿瘤的多药耐药。活性氧（ROS）是生物体有氧代谢产生的一类活性含氧化合物的总称，主要包括超氧阴离子（O₂·^-），羟自由基（·OH），以及过氧化氢（H₂O₂）和单线念氧（¹O₂）等，这些物质具有较强的氧化能力。过去ROS被认为只是一类损伤细胞的毒性物质，随着研究的深入，人们发现ROS在细胞信号转导过程中起着重要的的作用。而新近的研究表明，P-gp的表达受到细胞内氧化还原状态的影响，能够被ROS所调节。因为一些结构和功能迥异的mdr1诱导因子如：表皮生长因子（EGF）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、阿霉素（doxorubicin）、苯并芘（benzo[a]pyrene）或紫外线作用于细胞时都要产生ROS（包括：超氧阴离子、羟自由基、过氧化氢），由此推测ROS可能是它们调节mdr1基因和P-gp蛋白的共同通路。Wartenberg等已经证实在培养的人前列腺肿瘤多细胞团中内源性H₂O₂能够调节P-gp蛋白的表达。另有作者发现高水平ROS造成的氧化应激能够上调多药耐药相关蛋白（MRP）的表达。目的：选择P-gp过表达的肾癌细胞系ACHN及786-O作为MDR实验模型，检测外源性活性氧H₂O₂对细胞增殖的影响，探讨H₂O₂是否能够调节肾癌细胞mdr1基因的表达，以进一步研究多药耐药的活性氧机制，寻求新的逆转策略。方法：1，ACHN及786-O细胞用不同浓度的外源性H₂O₂孵育后WST-1细胞增殖及细胞毒性检测法检测H₂O₂对细胞增殖的影响，同法检测计算阿霉素、长春新碱对两种细胞的IC50值，观察H₂O₂对化疗药物细胞毒性的影响。2，以实时荧光定量RT PCR法定量检测H₂O₂对mdr1 mRNA基因表达的作用，目的基因上游引物序列：5’CCTGTACGCCAACACAGTGC 3’，下游引物序列：5’ATACTCCTGCTTGCTGATCC 3’。3，蛋白质印迹分析检测H₂O₂对P-gp表达的影响。4．罗丹明123的蓄积和外排实验测定P-gp功能。结果：1，低浓度H₂O₂（0.00001mM—0.1mM），具有促细胞增殖作用，而高浓度H₂O₂（0.1mM以上）呈现浓度依赖的细胞毒性。两种作用都呈时间依赖性，在作用72小时后，0.01、0.02、0.04mM浓度下的最大促细胞生长作用最为明显，0.1、0.2、0.4mM浓度下的抑制作用在72小时最显著。H₂O₂联合阿霉素、长春新碱孵育72小时后，0.005、0.01、0.02 mM H₂O₂分别增加了化疗药物的细胞毒性，其中0.02 mMH₂O₂使ACHN细胞对阿霉素，长春新碱的敏感性分别增加3.49倍，2.95倍（P＜0.01）；786-O增加5.43倍，4.47倍(（P＜0.01）。而高浓度的H₂O₂（0.2mM）使阿霉素，长春新碱对ACHN细胞的IC50值分别增加3.0及2.04倍，786-O细胞分别增加2.85，3.57倍(（P＜0.01）。0.1mM、0.2mM H₂O₂显著升高了ACHN，786-O的mdr1 mRNA表达水平，分别上调至对照组的1.29，3.4倍；1.35，2.82倍。相反，低浓度的（0.01 mM、0.02mM）H₂O₂降低了mdr1 mRNA表达水平，分别下1.18，4.05倍；1.22，3.76倍(（P＜0.01）。Western blot结果显示P-gp的表达与mdr1mRNA转录水平呈现出一致性的变化。罗丹明123实验显示，0.02mMH₂O₂孵育ACHN及786-O细胞72小时后不同程度使细胞内Rh123蓄积增加，而0.2mMH₂O₂浓度下降低了Rh123的蓄积(（P＜0.01）。结论：1，外源性活性氧H₂O₂对肾癌ACHN及786-O细胞增殖具有双重作用；低浓度H₂O₂能够促进细胞生长，高浓度抑制细胞生长。2，我们首次意外发现，H₂O₂对肾癌ACHN及786-O细胞mdr1mRNA的调节作用表现为双相特征，低浓度H₂O₂能够下调mdr1mRNA转录水平；高浓度H₂O₂能够上调mdr1mRNA转录水平。3，在肾细胞癌中，低浓度的H₂O₂可能是一种新的逆转因子。