【摘 要】
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为研究胰岛素前体的折叠途径,该文利用已经构建好的天然胰岛素原、 A19缺失胰岛素原和(A6,A11-Ala)胰岛素原基因,通过温度诱导在大肠杆菌体系中以包涵体的形式直接表达.经过
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为研究胰岛素前体的折叠途径,该文利用已经构建好的天然胰岛素原、 A19缺失胰岛素原和(A6,A11-Ala)胰岛素原基因,通过温度诱导在大肠杆菌体系中以包涵体的形式直接表达.经过超声波破碎细胞,包涵体裂解,二硫键还原、等电点沉淀及再氧化重组等后续过程,得到了纯度大于90﹪的目的蛋白.然后利用ResorceQ(1ml)阴离子效换柱,在0.05mol/LTris-Hcl(pH7.2),40﹪异丙醇中,以0-0.5mol/LNaCl梯度进一步纯化目的蛋白.在合适的条件下,将天然胰岛素原和两种突变体还原,然后对其重组过程中的重组率以及二键随时间的形成进行了研究.
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