目的:在2015年版《中国药典》基础上,筛选出质量合格的化橘红药材样品,系统建立适用于快速测定化橘红中5种黄酮类成分含量的一测多评法,并揭示两种来源化橘红(毛橘红与光橘红)之间的差异。方法:参考2015年版《中国药典》要求,首先建立用于一测多评法质量评价研究的化橘红药材的质量控制方法,对各批供试品进行水分、总灰分、水溶性浸出物和醇溶性浸出物的含量测定;通过性状鉴别、显微鉴别分析毛橘红与光橘红样品的外观性状和显微结构特征差异;采用2015年版《中国药典》薄层色谱法对化橘红药材进行薄层鉴别,并建立一种可有效区别毛橘红与光橘红样品的薄层色谱法;采用高效液相色谱法建立毛橘红与光橘红样品的HPLC指纹图谱,进行分析比较。通过以上方法,筛选出的合格的化橘红药材样品,建立一测多评法同时测定毛橘红与光橘红中柚皮苷、新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素5种黄酮类成分的含量,运用相关系数法对一测多评法计算所得的5种黄酮类成分含量与传统外标法计算所得的黄酮类成分含量进行验证。采用一测多评法对毛橘红与光橘红药材进行质量比较。结果:1用于一测多评法的化橘红药材的质量控制1.1理化鉴别31批毛橘红样品的水分含量范围在7.77%～9.81%之间,平均水分含量为8.78%;17批光橘红样品的水分含量范围在7.68%～10.88%之间,平均水分含量为9.46%。31批毛橘红的总灰分含量范围在2.77%～4.57%之间,平均含量为3.59%;17批光橘红的总灰分含量范围在3.60%～4.88%之间,平均含量为4.19%。31批毛橘红样品与17批光橘红样品的水分含量均不超过11%,总灰分含量均不超过5.0%,符合2015年版《中国药典》要求。浸出物含量测定结果显示,毛橘红样品的水溶性浸出物(热浸法)含量范围在36.60%～49.45%之间,平均含量为42.77%;光橘红样品的水溶性浸出物(热浸法)含量范围在37.91%～48.16%之间,平均含量为43.37%。毛橘红样品的乙醇浸出物(热浸法)含量范围在20.52%～27.12%之间,平均含量为23.68%。光橘红样品的乙醇浸出物(热浸法)含量范围为18.27%～28.34%,平均含量为 23.85%。1.2性状鉴别与显微鉴别31批毛橘红表面观呈黄绿色至深褐色,外果皮密被白色茸毛,其粉末中除了含有光橘红粉末中可发现的表皮细胞、中果皮薄壁细胞、网纹导管、螺纹导管、草酸钙方晶外,还含有其特有的非腺毛,横切面显微结构中,表皮细胞类方形,有非腺毛分布,外缘可见1列油室,呈圆形或椭圆形。17批光橘红表面观呈黄棕色至深褐色,外果皮光滑无毛,中果皮薄壁细胞排列较疏松,表皮不含非腺毛,油室较大。1.3薄层色谱研究薄层色谱法(药典法)结果显示,化橘红样品在柚皮苷对照品相应位置上显示相同颜色的斑点。本实验所建立的薄层色谱法,在紫外光(365nm)下,在Rf=0.35与Rf=0.27处,毛橘红样品的乙醇提取部位在相应位置上没有显示斑点。光橘红样品的乙醇提取部位在Rf= 0.35处显示蓝色斑点,部分光橘红样品在Rf= 0.27处显示蓝色斑点。1.4HPLC指纹图谱研究HPLC指纹图谱显示,从毛橘红与光橘红样品共检出色谱峰24个,对其HPLC指纹图谱进行色谱峰匹配,其中21个为共有峰,8、17号峰为毛橘红特有峰,2号峰为光橘红特有峰。31批毛橘红的HPLC指纹图谱相似度在0.954～0.995之间,17批光橘红的HPLC指纹图谱相似度在0.905～0.999之间,相似度均达到0.90以上。2 一测多评法的建立以柚皮苷作为内参物,建立新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素的相对校正因子分别为0.898、1.519、0.313、0.406,RSD<3.0%。运用相关系数法对一测多评法测定的毛橘红与光橘红的5种黄酮类成分进行验证,结果显示,一测多评法计算得到的5种黄酮类成分含量结果与外标法计算得到的5种黄酮类成分含量结果无显著差异。3 一测多评法评价毛橘红与光橘红药材质量采用一测多评对毛橘红与光橘红样品进行质量比较,结果显示,毛橘红柚皮苷含量在56.321 mg·g-1～274.513 mg·g-1之间,平均含量127.138 mg·g-1;新橙皮苷含量在0.032mg·g-1～0.163mg·g-1之间,平均含量0.085mg·g-1;野漆树苷含量在1.307mg·g-1～14.726mg·g-1之间,平均含量7.079mg·g-1;柚皮素含量在0.116 mg·g-1～1.162 mg·g-1 之间,平均含量 0.394 mg·g-1;芹菜素含量在 0.018 mg·g-1～0.094mg·g-1之间,平均含量0.05mg·g-1。光橘红柚皮苷含量在28.387mg·g-1～229.015 mg g-1之间,平均含量76.085 mg·g-1;新橙皮苷含量在0.040 mg·g-1～0.143 mg·g-1 之间,平均含量 0.078 mg·-1;野漆树苷含量在 0.857 mg·g-1～5.675 mg·g-1之间,平均含量2.488 mg·g-1;柚皮素含量在0.083 mg·g-1～0.373 mg·g-1之间,平均含量0.194 mg·g-1;芹菜素含量在0.017 mg·g-1～0.124 mg·g-1之间,平均含量0.052mg·g-1。独立t检验结果显示,毛橘红与光橘红的柚皮苷、野漆树苷、柚皮素成分的含量存在显著差异(P<0.05)。结论:1用于一测多评法的化橘红药材的质量控制所检化橘红样品的水分含量、总灰分含量、性状与显微鉴别、薄层鉴别等,均符合2015年版《中国药典》要求。初步拟定浸出物检查项,毛橘红与光橘红样品的水溶性浸出物(热浸法)不得少于33%,醇溶性浸出物(热浸法)不得少于18%。本实验所建立的薄层色谱法,色谱图斑点清晰、直观,可有效地区分毛橘红与光橘红。所建HPLC指纹图谱法可用于毛橘红与光橘红药材来源鉴别,可通过所测样品的特征峰准确区分化橘红样品的来源,所测毛橘红样品来源于化州柚,光橘红样品来源于柚。2一测多评法的建立一测多评法所建立的相对校正因子准确、可靠,可用于毛橘红与光橘红5种黄酮类成分的含量测定。通过一测多评法计算化橘红中5种黄酮类成分的含量,与传统外标法相比,该方法能在新橙皮苷、野漆树苷、柚皮素、芹菜素对照品紧缺的情况下,准确得到待测成分的含量,可降低实验成本。3 一测多评法评价毛橘红与光橘红药材质量毛橘红与光橘红在有效成分上存在差异,毛橘红的柚皮苷含量是光橘红柚皮苷含量的近一倍,毛橘红中野漆树苷、柚皮素含量是光橘红的数倍以上,毛橘红中的柚皮苷、野漆树苷、柚皮素成分含量显著高于光橘红。从药材来源上对毛橘红与光橘红区分,可提高化橘红的总体药材质量。