壬基酚降解酶的特性研究

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随着表面活性剂壬基酚聚氧乙烯醚(NPEOs)需求量的不断增大,其主要降解产物壬基酚(Nonylphenol,NP)在环境中也日益积累。作为类雌激素的内分泌干扰物,NP对人类健康和生态安全造成了潜在的威胁。因此如何消除NP成为近年来国内外研究的热点。不少学者已从自然界中筛选到了能够降解NP的菌株,并纷纷对其降解机理做了一定的探讨。但对于NP降解酶却少有报道。本论文利用NP降解菌属Serratia sp.LJ,对其产酶条件进行优化,在此基础上提取NP降解酶,并进一步对其酶学性质做了研究,对酶的固定化也做了初步的探索。(1)通过单因素实验和正交实验对NP降解菌株Serratia sp.LJ的产酶条件进行了优化,发现以NP为唯一碳源、硫酸铵为氮源,培养液初始pH为6.8,培养温度为30℃,种子活化时间为24 h,接种量为3%,在此条件下将菌株培养72 h后,产酶量最大,比优化前提高了1.77倍。(2)将菌株在最佳培养条件下振荡培养72 h,超声破碎制备粗酶液,分别采用丙酮沉淀法、无水乙醇沉淀法和硫酸铵盐析法提取NP降解酶并分别测定酶活,结果显示终体积分数丙酮70%、乙醇75%和硫酸铵终饱和度75%提取的酶,分别有最大酶活力。比较后得出,丙酮的酶活力和比酶活优于其它两种方法。(3)用丙酮提取酶液,分析了酶学性质,其最适pH为6.5,最适反应温度是35℃; pH在6.08.0、温度保持在3050℃之间时,酶有较高的稳定性;Cu2+、Zn2+、Al3+和Fe3+对NP降解酶的催化反应有抑制作用,添加K+和Co2+酶活力没有明显变化,Mn2+和Ca2+对酶活力有轻微的激活作用,Mg2+的激活作用最为明显。(4)采用海藻酸钠包埋法对NP降解酶进行固定化研究,发现3%(w/v)的海藻酸钠和2%的CaCl2制备固定化酶的活力最高,酶活回收47%;固定化酶的最适反应温度仍为35℃,最适pH为7.0;热稳定性、pH稳定性、操作稳定性和贮藏稳定性均有不同程度的提高。本研究对NP降解酶的理化性质做了初步的探索,这为NP降解酶的纯化及化学修饰、基因调控以及高效产NP降解酶的基因工程菌的构造奠定了基础,也为工业化制备NP降解酶制剂提供了技术支持,具有积极的环境意义和科学意义。
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