论文部分内容阅读
研究背景及目的巨噬细胞根据其功能与表达细胞因子的不同,可以分为两个极化方向:能够杀死病原体与肿瘤的M1,以及促进肿瘤细胞的生长、迁移甚至侵袭能力的M2。后者在免疫组化或流式细胞检测中常用CD68+CD206或CD68+CD163进行M2细胞的特异标记以进行识别与分选。此外,M2细胞还可以细分为若干亚群,这些亚群之间在细胞因子及细胞表面分子的表达上均有所差异。近来多个实验证实,肿瘤组织的微环境内有大量巨噬细胞,我们称之为肿瘤相关巨噬细胞(TAM),TAM在细胞表型上可能与M2更为相似;此外,肿瘤细胞也可以诱导巨噬细胞向M2方向极化,IL-6、LIF、IFN-γ等细胞因子可能在这一诱导过程中起了重要作用。另一方面,关于肿瘤细胞异质性的研究一直是肿瘤学的重点,除了肿瘤细胞本身的异质性,肿瘤相关巨噬细胞是否也具有异质性即是本实验所讨论的重点。通过不同类型的卵巢癌细胞系与单一来源的巨噬细胞进行相互作用,以期找到其中的差异性及其背后的原因。研究方法1.利用聚酯透明膜transwell使卵巢癌细胞与巨噬细胞系进行非接触性共培养,诱导巨噬细胞极化;2.利用流式细胞术对诱导后的巨噬细胞进行分群分析,计算CD68+CD206双阳性细胞(即M2细胞)占全部CD68阳性细胞(即巨噬细胞)的比例,比较不同诱导条件下M2细胞极化比例的差异,及其随时间的变化;3.收集经不同条件诱导极化的巨噬细胞的上清,利用ELISA对细胞上清中的细胞因子浓度进行测定与分析;4.将经过不同诱导条件极化的巨噬细胞与A2780反向共培养一定时间后,测定不同组A2780生长速率的变化以及细胞因子表达上的差异;研究结果1.不同卵巢癌诱导巨噬细胞向M2极化的能力不一样,且群体中M2比例随时间变化的规律也不同。2.不同卵巢癌细胞诱导出的M2细胞分泌的细胞因子、对肿瘤细胞的生长促进作用也具有异质性,即不同肿瘤细胞诱导出的M2细胞本身也具备异质性。3.反向诱导72h后,平均IL-10浓度与相应肿瘤细胞生长速率呈现显著正相关关系,提示IL-10可能通过巨噬细胞-卵巢癌的相互关系影响卵巢癌的增殖与发展。4.永生化卵巢上皮细胞在诱导巨噬细胞向M2极化方面表现出了与卵巢癌相似的特性,若比较永生化卵巢上皮细胞基因结构与正常卵巢上皮细胞之间的差异,或许可提示巨噬细胞极化过程中有重要作用的基因。结论卵巢癌细胞在诱导巨噬细胞向M2极化方面具有异质性,此种差异不仅存在于透明细胞癌与腺癌这样不同组织类型的卵巢癌之间,也存在于同样是腺癌但是来源不同的肿瘤之间;卵巢癌诱导出的M2在细胞因子的表达、对肿瘤细胞生长的促进作用方面均具有异质性,这种异质性本身即是肿瘤异质性的体现。