米糠油不饱和脂肪酸对肝癌细胞HepG2的影响及其机制研究

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本论文测定了米糠油不饱和脂肪酸对肝癌细胞HepG2的影响并初步分析了其作用机制。本文选用MTT法测定了肝癌细胞存活率及细胞生长曲线;采用光镜和荧光显微镜观察了肝癌细胞在米糠油不饱和脂肪酸处理前后细胞形态的变化;利用流式细胞仪检测了米糠油不饱和脂肪酸处理前后肝癌细胞生长周期的变化;同时,通过Transwell小室迁移实验测定了米糠油不饱和脂肪酸对肝癌细胞迁移能力的影响;软琼脂克隆细胞实验测定了米糠油不饱和脂肪酸对肝癌细胞克隆形成能力的变化,并通过Western blot检测凋亡相关因子NF-κB在米糠油不饱和脂肪酸处理前后表达的变化,以此研究和探讨米糠油不饱和脂肪酸对肝癌细胞的影响及其作用机理。实验结果显示,米糠油不饱和脂肪酸在一定浓度范围内对肝癌细胞有明显的抑制作用,当米糠油和亚麻酸浓度达到0.15mmol/L、油酸0.2mmol/L、亚油酸0.08mmol/L以上时,抑制作用明显。细胞周期检测结果显示米糠油不饱和脂肪酸处理肝癌细胞后G2期细胞含量下降,使其发生S期阻滞。光镜及荧光显微镜观测结果显示,肝癌细胞呈多边形,分布匀称,轮廓清晰,排列有序,核仁2-5个,细胞生长良好,贴壁牢固,胞间连接紧密;而经米糠油不饱和脂肪酸处理后的肝癌细胞明显收缩变圆,胞体变小,细胞间隙增大,胞核模糊不清,部分细胞出现脱落现象,核仁外溢。迁移实验结果显示,处理组迁移率不同程度的低于正常对照组,迁移抑制率分别达到32.85±3.24%、25.55±2.56%、41.61 ±4.08%、47.45±4.60%。细胞克隆形成实验结果说明,米糠油不饱和脂肪酸处理后的肝癌细胞克隆能力明显减弱,甚至无克隆出现。Western blot免疫印迹结果显示米糠油不饱和脂肪酸处理肝癌细胞后在整体范围内能下调NF-κB的表达并促进其发生核转运。研究结果表明,米糠油不饱和脂肪酸在体外对肝癌细胞HepG2有显著的增殖抑制作用,并能有效降低肝癌细胞的迁移能力和克隆形成。推测米糠油不饱和脂肪酸可能通过促使NF-κB发生核转运进而激活周期阻滞相关因子的表达而发生S期阻滞,达到抑制HepG2增殖的作用效果。这将为米糠油的进一步开发利用提供研究基础,并为寻找和开发一种新型的天然抗癌活性物质提供参考依据。同时也为米糠油不饱和脂肪酸在食品及医药方面的应用研究提供理论基础。
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