健肝乐颗粒(芍药甘草汤)治疗肝功能异常临床应用专家共识研究

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目的:应用文献研究和专家共识法开展健肝乐颗粒临床运用专家共识的编制工作,从而为临床合理使用健肝乐颗粒治疗肝功能异常提供合理指导。同时结合网络药理学及分子对接技术探讨健肝乐颗粒治疗肝功能异常的潜在机制,为后续对该药更深入的研究提供依据。方法:(1)首先,以“芍药甘草汤”及其别名检索中华医典、中医古籍全文数据库(国医典藏)、中医古籍数字图书馆数据库,整理芍药甘草汤的古代文献,从别名演变、主治病证、药物组成、剂量、炮制与煎服法方面进行考证。然后以“健肝乐颗粒”、“Jian’ganle Granules”,在中国生物医学文献(CBM)、中国知网(CNKI),万方数据知识服务平台及维普网(VIP)、Sinomed、Pub Med、Web of science中进行检索,并借助Revman5.2和GRADE profile软件,用GRADE分级方法对文献进行证据质量评价。(2)运用包括问卷调查法、名义组法和共识会议法在内的专家共识法,形成推荐意见和共识建议。首先,通过对140名临床医师进行两轮问卷调研,并对问卷调查结果进行统计分析,得出原始临床问题清单,结合文献研究所得的证据,运用名义组法和共识会议法,召集29位专家进行两次共识研讨会,达成共识后,确定优选临床问题及最终的推荐意见和共识建议条目,形成《健肝乐颗粒治疗肝功能异常临床应用专家共识》。(3)通过TCMSP获取健肝乐颗粒相关中药的有效化学成分及潜在靶点;从TTD、OMIM等数据据库获取肝功能异常的疾病靶点,并用韦恩图筛选并绘制出与中药靶点基因的交集基因;使用String数据库构建蛋白相互作用网络;使用Cytoscape3.8.0软件绘制活性成分-靶点、疾病-中药-化合物-交集靶点网络图;使用R语言Bioconductor安装包,进行GO及KEGG通路富集分析;用Vina软件对筛选出来的成分进行分子对接。结果:(1)古籍文献:共得到古籍书目242本,有效记载的条文452条,其中张仲景的《伤寒论》为最早记载芍药甘草汤的著作,条文、书籍数目最多的为明清时期,书籍类目涉及伤寒金匮注解论述类、综合性著作类与临证各科类及儿科类;在历代医籍记载中芍药甘草汤有去杖汤、六半汤、中岳汤、戊己汤、甲己化土汤5种别名,其主治病证主要包括脚挛急、腹痛、小肠咳;方剂组成药物主要为白芍、炙甘草,制法、煎服法方面则无特殊。现代文献:得到符合要求的健肝乐颗粒现代文献14项,得到相关证据评价综合的森林图和证据概要表。(2)通过两轮问卷调查的结果分析,得到25个原始临床问题清单,通过两轮专家共识讨论会,确定了15个优选临床问题以及针对这15个问题的推荐意见/共识建议条目,分别为推荐意见5条,共识建议10条,最终形成了《健肝乐颗粒治疗肝功能异常临床应用专家共识》。(3)网络药理学筛选得到健肝乐颗粒有效药物靶点245个,肝功能异常疾病靶点8950个,药物-疾病交集基因202个;经网络相互作用网络及拓扑结构分析得到16个核心靶点,155条相互作用关系;槲皮素(quercetin)、山柰酚(kaempferol)、柚皮素(naringenin)等为健肝乐颗粒的主要活性成分,MAPK3、MAPK1、JUN、TP53等为主要作用靶点。GO富集分析显示靶点所在的细胞分组主要为薄膜筏、膜微域、膜区域;生物学过程主要富集在有对金属离子的响应、对脂多糖的反应;分子功能主要为核受体活性、转录因子活性。KEGG富集发现白介素17信号通路、TNF肿瘤坏死因子信号通路、Th17细胞分化信号等为主要通路。进一步筛选核心靶点及化合物成分进行分子对接显示MAPK3、MAPK1、JUN、TP53作为核心靶点可与槲皮素、山柰酚、柚皮素小分子稳定对接。结论:本研究通过文献研究、专家共识法,形成了健肝乐颗粒治疗肝功能异常的临床应用专家共识,能为临床合理使用健肝乐颗粒提供更好的指导。网络药理学显示,健肝乐颗粒中的槲皮素、山柰酚、柚皮素等成分通过调控白介素17信号通路、TNF肿瘤坏死因子信号通路、Th17细胞分化信号等通路,作用于MAPK3、MAPK1、JUN、TP53等靶点,起到减轻炎症损伤、调整机体免疫、抑制癌变等作用。
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