【摘 要】
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受孕绵羊是研究人类生殖和分娩机理的理想动物模型之一,具有体型大小及胚胎发育过程与人体接近、便于实验观察等优点.为了理解绵羊Calponin在绵羊子宫平滑肌中的功能及调节机
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受孕绵羊是研究人类生殖和分娩机理的理想动物模型之一,具有体型大小及胚胎发育过程与人体接近、便于实验观察等优点.为了理解绵羊Calponin在绵羊子宫平滑肌中的功能及调节机理,该研究的目标确定为分子克隆和特征化绵羊Calponin基因.我们从绵羊子宫平滑肌组织获得了总RNA,通过RT-PCR获得子宫平滑肌的第一链cDNA文库,进而使用5-RACE和3-RACE的方法得到了绵羊CaP h1的mRNA未知序列.初次PCR扩增所用的锚定引物序列来自对GenBank中人类、小鼠和野猪的Calponin mRNA序列的同源保守性分析.其后的RACE扩增则依据对初次PCR产物序列测定结果.克隆和序列测定表明,我们得到了包含全部AA编码区域,以及5-末端和3-末端UTR区域的绵羊Calponin全长cDNA序列(GenBank Accession Number:AY327118).绵羊子宫平滑肌Calponin mRNA全长1499bp,编码297个预期氨基酸,5-UTR及3-UTR分别为79bp和 529bp.该核基因DNA全长约8kb,由7个外显子和6个内含子组成.同源比较发现该基因外显子在不同物种间相对保守;与人类、小鼠、大鼠、鸡和野猪Calponin mRNA同源性分别为88%、81%、79%、81%和92%,但不同物种间内含子存在巨大差异(>40%).对该基因在绵羊染色体上的定位工作正在进行.这项研究填补了绵羊Calponin基因克隆的空白,为进一步研究该基因的功能及调节子宫平滑肌收缩的机理奠定了基础.
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