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目的:探究MRL/lpr狼疮小鼠的骨髓间充质干细胞(bone marrow masenchymal stem cells,BMMSCs)皮下成骨模型成骨及造血的情况,并进一步观察表面神经型钙粘蛋白(Neural calcium-dependent adhesin protein,N-cadherin)对其产生的影响。方法:1.将本实验分成2组:(1)实验组MRL/lpr狼疮鼠组(MRL/lpr);(2)对照组C57BL/6小鼠组(C57BL/6)。首先取12周龄后的MRL/lpr狼疮小鼠与同龄C57BL/6小鼠的股骨,经固定、脱钙、包埋、切片等步骤制成病理切片,并进行HE染色比较MRL/lpr狼疮小鼠与同龄C57BL/6小鼠股骨干骺部骨质情况的差异,利用免疫组织化学染色比较MRL/lpr狼疮小鼠与同龄C57BL/6小鼠股骨干骺部N-cadherin表达的差异。2.采用全骨髓贴壁法将MRL/lpr狼疮小鼠与C57BL/6小鼠的BMMSCS进行分离培养,待BMMSCs增殖至第三代后将其进行定向诱导使BMMSCs分化为成骨细胞,利用Western Blot的方法检测两组小鼠的BMMSCs及OB的N-cadherin表达差异。3.皮下成骨模型的构造:将分离培养至第三代后的MRL/lpr狼疮小鼠与C57BL/6小鼠的BMMSC与基质胶、BMP-2混匀形成共孵育物,分别移植入Nod-Scid小鼠的双侧肩关节后的皮下肓腔内,待8周后形成皮下包块组织。4.运用流式细胞学对皮下成骨模型中的血细胞进行分析:将MRL/lpr狼疮小鼠与C57BL/6小鼠的皮下成骨模型小鼠在SFP环境中饲养8周后处死取出皮下包块,剪取相同体积包块经细胞滤网研磨等操作制备成细胞悬液,并孵育特异性表面抗体(APC anti-CD3e,PE anti-B220,APC anti-CD138,PE anti-CD19,APC anti-Ter119,FITC anti-CD11b,PE anti-Sca-1),利用流式细胞仪对其各系血细胞比例进行分析,比较MRL/lpr狼疮小鼠与C57BL/6小鼠皮下成骨模型在造血系统方面存在的差异。5.将MRL/lpr狼疮小鼠与C57BL/6小鼠的皮下成骨模型小鼠饲养8周后处死取出皮下包块,经固定、脱钙、包埋、切片等过程制成病理切片,并利用HE染色技术比较两组小鼠皮下包块的成骨情况的差异,利用免疫组化技术比较两组的N-cadherin表达的差异。6.利用慢病毒转染技术转染MRL/lpr狼疮小鼠的BMMSCs下调N-Cadherin的表达,利用Western Blot鉴定N-Cadherin蛋白的表达水平。将低表达N-Cadherin的MRL/lpr狼疮小鼠的BMMSCs增殖后构造皮下成骨模型,将成熟的皮下包块进行流式细胞学血细胞分析和病理学成骨情况的分析,并与未经转染的MRL/lpr狼疮小鼠的BMMSCs皮下成骨模型的在成骨和造血情况进行比较,分析N-Cadherin的表达水平对MRL/lpr狼疮小鼠的BMMSCs的成骨和造血能力的影响。7.分离培养C57BL/6小鼠的BMMSCs对12周龄的MRL/lpr狼疮小鼠进行外源性的BMMSCs尾静脉输注,8周后处死MRL/lpr狼疮小鼠取其股骨进行病理切片制备分析股骨干骺部骨质情况,另一部分分离培养BMMSCs,进行Western Blot比较其N-cadherin表达水平与输注前的差异;构造皮下成骨模型,比较其成骨及造血能力与未进行BMMSCs输注的MRL/lpr狼疮小鼠的差异,探究外源性BMMSCs输注后N-cadherin的表达水平对MRL/lpr狼疮小鼠在成骨及造血方面的影响。结果:1.与C57BL/6小鼠相比,MRL/lpr狼疮小鼠的股骨干骺部骨质结构较疏松,其干骺部成骨细胞的N-cadherin的表达较高;MRL/lpr狼疮小鼠BMMSCs及OB的N-cadherin表达水平均高于C57BL/6小鼠。2.MRL/lpr狼疮小鼠皮下成骨模型的类骨质形成较C57BL/6小鼠组生成减少,其血管管径大小不一、血细胞较少,且其N-cadherin的表达水平高于C57BL/6小鼠组。MRL/lpr狼疮小鼠皮下成骨模型中CD138~+CD19~-的浆细胞比例、CD117~+Sca1~+的干细胞比例均较C57BL/6小鼠组升高,Ter119~+的红细胞比例降低。3.经慢病毒转染N-cadherin低表达的MRL/lpr狼疮小鼠组的皮下成骨模型中类骨质的形成多于MRL/lpr狼疮小鼠组,且其血管形成增多,流式细胞学分析CD138~+CD19~-浆细胞比例较转染前降低;与C57BL/6小鼠组相比CD117~+Sca1~+的干细胞比例升高。4.经BMMSCs输注的MRL/lpr狼疮小鼠BMMSCs的N-cadherin表达较前下降,输注BMMSCs的MRL/lpr狼疮小鼠皮下成骨模型形成类骨质及血管的能力较前改善。结论:MRL/lpr狼疮小鼠存在成骨及造血方面的异常,由BMMSCs分化成的OB表面粘附分子N-cadherin高表达可能是MRL/lpr狼疮小鼠成骨及造血异常的影响因素。对MRL/lpr狼疮小鼠进行BMMSCs输注可以改变其N-cadherin的表达,对成骨及造血的损伤有一定的治疗意义。