论文部分内容阅读
裂褶菌(Schizophyllumcommune)是一个具有较高药用价值的食用菌，其多糖裂褶菌素具有显著增强免疫力的作用，并被应用于临床。以裂褶菌鲜子实体为材料，通过硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素阴离子交换柱层析、CM-纤维素阳离子交换柱层析、Q-Sepharose阴离子交换柱层析和Superdex75凝胶过滤的方法，从裂褶菌中分离纯化出了凝集素、酸性磷酸酶和溶血素三种蛋白。
裂褶菌凝集素是由两个相同亚基组成的分子量为64kDa的蛋白，其N-端氨基酸序列为APPNFPLLVPGNDKLLAVISAMTP，和紫色粘杆菌细胞分裂蛋白的部分序列、猫抑制素a亚基前体蛋白和灵芝凝集素的部分序列相似性较高。凝集素的凝集活性被菊糖和乳糖抑制。温度低于40℃,NaOH和HCI的浓度分别不高于12.5mM和25mM时，凝集活性稳定。裂褶菌凝集素具有促进小鼠脾细胞分裂、抗肿瘤细胞增殖和抑制HIV-1逆转录酶的活性，但是没有抗真菌活性。荷瘤小鼠腹腔注射裂褶菌凝集素后，一定程度上延长了小鼠的存活时间，减缓了荷瘤小鼠体重的增加速度。
裂褶菌酸性磷酸酶是由单个亚基组成的分子量为72.5kDa的蛋白，其N-端氨基酸序列为NAP(T)WAQIDEV。该酶的最适反应pH值是4.6，最适反应温度是50℃。温度在20℃-50℃之间，pH在4-9之间时活性稳定。Hg2+、Cu2+、Fe3+、A13+对酶活性表现强烈的抑制作用，10mM的Fe2+离子可以完全抑制酶的活性。在最适反应条件下，以p-NPP为底物测定的Km和Vmax值分别为0.248mM和9.093×10-3μmol/min。
裂褶菌溶血素是由单个亚基组成的分子量为29kDa的蛋白，其N-端氨基酸序列为ATNYNKCPGA。裂褶菌溶血素的活力在pH值5.5～6.5之间表现稳定。裂褶菌溶血素具有不耐热的特性，活性稳定范围在20～40℃之间。Hg2+和Cu2+对溶血素的活性有强烈的抑制作用。溶血素对蛋白酶抑制剂PMSF不敏感，二硫苏糖醇对溶血素的活性有显著的抑制作用。溶血素的溶血作用受蔗糖和棉子糖的强烈抑制，甘露糖、密二糖、葡萄糖对溶血素活性有微弱的增强作用。