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游离小孢子培养技术作为一种重要的遗传育种和基础研究手段,已广泛应用于芸薹属作物中。但芥菜小孢子培养研究起步较晚,目前国内外相关的研究也较少,芥菜游离小孢子培养技术仍处于初步探索阶段。为完善芥菜小孢子培养技术体系,促进该体系在芥菜育种和基础研究中的应用,本文选取不同类型的36份芥菜材料,通过显微观察确定大部分小孢子处于单核靠边期所对应的花蕾长度,即为适合培养的花蕾大小;同时对供试材料进行游离小孢子培养,研究基因型、热激诱导条件、供体植株生长条件和外源ABA对芥菜小孢子培养的影响;用流式细胞仪对两个芥菜小孢子植株群体进行倍性鉴定。研究结果如下:1.芥菜处于单核靠边期的小孢子呈三棱形,有三条明显的萌发沟,体积比单核中期的小孢子要大,这些特征可作为进行小孢子快速显微镜检的形态学标志,用来确定处于单核靠边期的小孢子。2.适于芥菜小孢子诱导培养的花蕾,其长度范围一般是2~3mm,但基因型不同,各材料适宜培养的花蕾长度稍有差异。3.对36份芥菜材料进行游离小孢子培养,有16份诱导出胚,诱导率达44.4%,其中V03B0097和A12959出胚率最高,分别为5.87胚·蕾-1和5.54胚·蕾-1,其他14份材料出胚率较低。出胚率随基因型的不同表现出很大差异,本研究认为基因型是影响芥菜小孢子培养效果的决定性因素。4.适于芥菜小孢子培养的热激条件在不同基因型间存在差异。35℃、3d是本试验中较多材料适宜的热激条件,其他的热激温度、热激天数组合尽管适用的基因型范围不如35℃、3d广,但在本试验的部分材料小孢子培养中也表现较好的诱导效果。5.供体植株在较低的温度环境—25.7℃/14.25℃(平均最高气温/平均最低气温)—生长有利于芥菜小孢子诱导胚胎发生。6.不同芥菜基因型对外源ABA处理的反应不同,与对照相比,V03B0097在10uM的ABA处理下提高了小孢子胚胎发生率,V03C0001在ABA处理下却降低了小孢子出胚率,V03A0223、V03C0021和A10801的ABA处理结果与对照没有明显差异,长期的外源ABA处理不利于芥菜小孢子培养。7. V03B0097和A12959两个芥菜小孢子植株群体均是由单倍体(1n)、双单倍体(2n)和嵌合体(1n+2n)组成的混合型群体。本研究中芥菜的自然加倍率较低,其中V03B0097群体的自然加倍率为21.52%,A12959群体的自然加倍率为5.39%。