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目的当药苦苷是环烯醚萜类具有代表性的化合物之一,存在于各种常用中药中,据报道当药苦苷体外活性很弱,说明其有可能本身不具有药理活性,有可能以体内代谢物的形式发挥药效。但其体内代谢过程至今仍未被阐明,本文旨在揭示当药苦苷的主要体内代谢产物。方法利用液质联用对当药苦苷的体内代谢物进行扫描,对可能的代谢产物进行质谱推测结构,并采用合成代谢物对照品的方式进行结构的准确确认;利用化学衍生化对质谱检测不灵敏的体内代谢物进行修饰,以提高其质谱检测灵敏度;对主要可能的肝脏代谢产物,利用肝微粒体培养的方法对其代谢产物进行研究。结果对主要环烯醚萜类化合物当药苦苷体内代谢过程进行了研究,结果证明环烯醚萜类化合物当药苦苷在大鼠体内首先经肠道菌群β-葡萄糖苷酶水解生成苷元,具有半缩醛结构的苷元化学性质不稳定,在肠道菌群的作用下很容易转化成为红百金花内酯和含氮化合物龙胆碱。UPLC/MS检测到龙胆碱在肝脏中代谢成为具有手性碳原子的含氮化合物gentiandiol。而红白金花内酯经二硝基苯肼衍生化后,在灌胃给予当药苦苷的大鼠体内被检测到。借助吡啶甲酸衍生化方法,证明红百金花内酯在肝脏中和肠道菌群作用下都代谢成为新的代谢产物5-羟甲基异苯并二氢吡喃-1-酮。5-羟甲基异苯并二氢吡喃-1-酮又与硫酸酯酶结合最终生成5-羟甲基异苯并二氢吡喃-1-酮硫酸酯排出体外。即当药苦苷在大鼠体内可转化成含氮化合物和二氢异香豆素类,经抗HBV、HCV活性测试,含氮化合物活性较好,揭示了环烯醚萜类化合物的作用实体为其体内代谢物。结论1:当药苦苷在大鼠体内可被代谢为新含氮化合物。大鼠灌胃给药当药苦苷后,在肠道中被代谢成龙胆碱,龙胆碱被吸收入血后在肝脏进一步被代谢成gentiandiol,而后通过尿液排出体外。此研究首次证明了环烯醚萜类化合物(单萜)可在体内被生物转化成生物碱。2:当药苦苷在大鼠体内可被代谢为香豆素类化合物。当药苦苷大鼠灌胃后,首先被肠菌代谢为香豆素类化合物红白金花内酯,部分红白金花内酯又被肠道代谢为5-羟甲基异苯并二氢吡喃-1-酮,而吸收入血的红白金花内酯又被肝脏代谢为5-羟甲基异苯并二氢吡喃-1-酮,即5-羟甲基异苯并二氢吡喃-1-酮是由红白金花内酯在肠菌及肝脏的共同代谢产物,而5-羟甲基异苯并二氢吡喃-1-酮最终以硫酸酯的形式排出体外。活性测试证明当药苦苷本身没有明显药理活性,其生物活性是以其代谢物形式发挥作用,本研究结果预示其他环烯醚萜苷类化合物也都是以代谢物形式发挥药效。本文首次证明了环烯醚萜类化合物在体内可被代谢成生物碱、首次设计相应衍生化方法提高了肠菌代谢产物的检测灵敏度,本实验结果为其他环烯醚萜体内代谢研究提供了重要的参考,从理论上丰富了环烯醚萜的体内代谢过程研究。