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四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)暴露会造成肝脏、肾脏损伤以及神经系统抑制等,严重危害人类健康。目前CCl4毒性研究主要集中在其肝肾毒性及其相关机制,但是,关于CCl4对神经系统损伤的研究远不够深入,尤其对于在活体观察CCl4长期暴露对神经细胞形态结构和功能的影响鲜见报道。海马与学习记忆密切相关,是神经毒理学研究的理想靶器官。树突棘和突触是神经元的主要功能结构,对毒物等外源性神经毒素反应敏感,因此,其结构和功能的病理改变常作为毒物损伤以及某些神经系统疾病功能障碍的成因。目的建立CCl4长期暴露模型,模拟CCl4长期接触毒性,观察小鼠行为学改变以及CCl4长期暴露对小鼠海马锥体细胞树突棘和突触的影响。方法建立CCl4长期暴露小鼠模型,利用Morris水迷宫观察CCl4暴露后小鼠学习记忆能力改变,利用DiI-散射标记、免疫组织化学、透射电镜等方法观察CCl4长期暴露后小鼠海马锥体细胞形态和结构改变。结果(1)利用Morris水迷宫观察CCl4长期暴露对小鼠学习记忆能力的影响。在获得性训练和对位训练中,虽然CCl4高组剂量组和低剂量组小鼠潜伏期平均值差异未达到显著性水平(P>0.05),探查实验和对位探查实验中两组小鼠在中环停留的距离与总路程之比的差异也未达到显著性水平(P>0.05),但在搜索策略的比较中对照组小鼠空间搜索策略百分比明显高于CCl4组,且达到显著性差异(P<0.05),对照组重复环绕策略百分比明显高于正常组小鼠且达到显著性差异(P<0.01)。可以得出结论CCl4干预小鼠与对照组小鼠相比,学习与记忆能力有显著性差异,低于对照组小鼠。(2)利用DiI-散射标记神经元的方法对各实验组小鼠海马锥体细胞进行标记,激光共聚焦显微镜观察树突棘病理变化,结果表明CCl4长期暴露能够诱导小鼠海马锥体细胞树突棘密度降低(数量减少)、长度增加,并具有剂量相关性及长时程增强(long-termpotentiation, LTP)效应。(3)利用免疫荧光技术,synaptophysin标记对照组与药物组(低剂量组和高剂量组)小鼠,结果显示药物组海马突触前体的synaptophysin荧光阳性颗粒数量随着CCl4长期暴露剂量升高而减少,提示CCl4长期暴露引起突触减少,并呈剂量相关性。(4)利用透射电镜对对照组和药物组小鼠突触超微结构进行观察,结果显示:突触结构出现一定改变,与对照组相比,药物两组均出现突触小泡减少,突触间隙模糊。结论CCl4暴露能够降低小鼠学习记忆能力,造成小鼠海马锥体细胞树突棘和突触的形态改变及数量丢失,并且对神经系统的影响具有剂量相关性及LTP效应。本研究为CCl4等外源性神经毒素暴露后相关治疗药物以及保健食品的开发等提供了有价值的理论和实验依据。