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为研究中药复方的组方原理,将HPLC和HPLC- MS两种手段应用于研究芍药甘草复方配伍前后体内外物质基础的变化;利用HPLc指纹图谱技术研究配伍前后芍药甘草体内HPLC指纹图谱中各特征峰药动学变化,从药动学的角度,揭复方配伍的内涵。在建立芍药甘草复方血清药理学和血清药物化学研究的基础上,研究指纹图谱与解痉药效的谱效相关性,探寻芍药甘草体内解痉活性成分。
目的:(1)建立芍药甘草血浆样品HPLC指纹图谱体内分析方法;建立指标性成分HPLC体内分析方法;(2)考察芍药甘草配伍前后体外水煎液化学成分的变化,以及各组分体内药动学变化;(3)通过谱效关系研究初步探讨芍药甘草复方体内解痉活性成分;(4)考察芍药甘草效应组分配伍使用,指标性成分甘草酸及甘草苷药动学的变化。
方法:(1)考察芍药甘草血浆样品HPLC指纹图谱分析方法,选择最佳检测波长、流动相条件以及血浆预处理方法,并在此条件下建立芍药甘草血浆样品HPLC指纹图谱方法学,建立甘草酸、甘草苷血浆样品HPLC分析方法;(2)以HPLC和HPLC-MS两种分析方法测定芍药甘草配伍前后水煎液中物质基础变化,并且研究芍药甘草合煎液与芍药、甘草单煎液给药后体内物质基础变化;(3)大鼠随机分组后灌胃给予芍药甘草合煎液、芍药单煎液,然后在不同时间点取血,测定各时间点血浆样品HPLC指纹图谱,以保留时间处色谱峰定性,研究不同配伍条件下各血浆样品指纹图谱特征峰药动学参数变化,采用SPSS 13.0软件对各指纹图谱特征峰的药动学参数进行方差分析;(4)正交设计不同组合的芍药甘草效应组分(芍药苷、甘草酸、甘草总黄酮),各组给药后取大鼠血清进行胃底肌条血清药理学实验,以抑制率为药效变量X,各组血清样品HPLC指纹图色谱峰峰面积为变量Y,通过相关性分析研究与解痉关系密切的色谱峰物质(5)大鼠随机给予芍药甘草效应组分、甘草酸效应组分、甘草黄酮效应组分,研究配伍前后主要指标性成分药动学参数的变化。
结果:(1)HPLC研究发现芍药甘草配伍前后体外指纹图谱相似度) 0.9,而质谱分析发现10个化合物在配伍前后没有变化,但是却有其它成分不同。HPLC分析了芍药甘草血浆样品配伍前后变化,对各入血组分进行了归属,质谱研究发现10个组分的归属与HPLC归属相同,5个组分归属不同;(2)对各入血组分药动学研究表明,芍药配伍甘草使用后显著增加芍药成分的体内吸收,主要表现在各芍药物质AUC,Cmax显著增加,(3)芍药甘草效应组分的谱效研究表明,与解痉药效较相关的4个色谱峰,其皮尔逊相关系数)0.4;(4)芍药甘草效应组分配伍给药,指标性成分甘草酸、甘草苷药动学参数AUC、Cmax显著增加。
结论:(1)芍药甘草配伍前后化学物质发生变化,体外配伍时煎煮产生新的化合物,配伍使用时体内也发生变化;(2)芍药配伍甘草使用后与芍药单独给药相比,来源于芍药的成分体内吸收显著增加;(3)谱效相关分析发现4个与解痉药效显著相关的色谱峰: (4)芍药甘草效应组分配伍使用,指标性成分体内吸收增加。