【目的】 通过观察Wistar成鼠自体激活雪旺细胞和人胚神经干细胞在体外培养的生长特性及相互作用,将上述两种细胞移植入大鼠脊髓急性损伤部位,对脊髓损伤恢复情况进行行为学、神经电生理学和组织学评价,探讨雪旺细胞与神经干细胞在脊髓损伤修复过程中所起的作用,并评价该治疗方法的效果。 【方法】 分别从Wistar成鼠股神经和人胚胎脑皮层中体外分离获得原代自体激活雪旺细胞和神经干细胞,进行纯化和体外传代培养。待神经干细胞稳定传4代后,进行神经巢蛋白(Nestin)免疫荧光染色以鉴定神经干细胞。将两种细胞共培养。同时建立大鼠脊髓损伤动物模型,并将40只Wistar成鼠(雌性,体重200±30g)分为4组:空白对照组;自体激活雪旺细胞移植组;神经干细胞移植组;神经干细胞联合自体激活雪旺细胞移植组。将预先准备好的DMEM;雪旺细胞;神经干细胞;共培养的神经干细胞和雪旺细胞,分别对应于上述4组移植实验动物的脊髓损伤部位。术后每周对患肢进行功能评价。12周后每组随机选择2只动物进行10%BDA神经顺行示踪标记,标记2周后(术后14周)处死动物。取出动物损伤段脊髓作5μm快速冰冻切片后,进行Cy3荧光染色、荧光免疫组化及HE染色,染色切片经显微图像分析软件Image pro plus分析处理。脊髓损伤术后每周每组随机选取5只大鼠采用NICOLET Viking IVB型肌电图仪进行体感诱发电位(Somatosensory evoked potential, SEP)检查,计算出修复后的神经电兴奋的传导速度,与正常鼠比较求比值。采用方差分析(ANOVA)及SNK-q进行统计学分析。