【摘 要】
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根据已发现的海葵神经毒素多肽的两端保守氨基酸序列,设计简并引物,用RT-PCR的方法,从采自湛江的侧花海葵（Anthopleurasp）触手总RNA中分离出5个神经毒素新基因,它们分别编码5个
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根据已发现的海葵神经毒素多肽的两端保守氨基酸序列,设计简并引物,用RT-PCR的方法,从采自湛江的侧花海葵（Anthopleurasp）触手总RNA中分离出5个神经毒素新基因,它们分别编码5个长度都是47个氨基酸的毒素多肽,经Blast同源分析,它们和Ap-C、AsV有很高的同源性,属Ap-A、Ap-B类海葵毒素.将海葵神经毒素基因（hk2a）连接到融合表达载体pTRX的TrxA基因的3端,构建成符合读码框的融合表达质粒.对重组海葵毒素hk2a在大肠杆菌中的诱导表达条件（诱导培养温度、时间、IPTG浓度）、以及分离纯化方法进行研究,优化出一条重组hk2a的表达及纯化工艺路线.经纯化后的重组hk2a多肽纯度在95﹪以上,得率约10mg/L.对重组hk2a的生物学活性进行了研究,毒理实验结果表明,它对小鼠有一定的毒性,其半数致死量（LD<,50>）J1.4mg/kg.采用大鼠离体心房模型,研究结果表明,重组hk2a能明显增强正常K-H液和低Ca<2+>K-H液中大鼠离体心房的收缩幅度.在低Ca<2+>K-H液,作用更加显著,高、中、低剂量的重组hd2a（2.0、1.0、0.5（μg/ml））都能明显增强心肌收缩,增强高峰出现在加入样品3-5分钟后,最后增幅可达344﹪,增加幅度与剂量呈现一定相关性.海葵毒素新基因的发现,以及高效表达、纯化方法的建立,为进一步研究其结构与功能关系打下基础.
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