【摘 要】
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多粘菌素E(polymyxin E)是多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)产生的一种多组分碱性多肽类抗生素,主要用于治疗多药耐药G-菌引起的感染。多粘菌素E生产菌种遇到一个关键问题
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多粘菌素E(polymyxin E)是多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)产生的一种多组分碱性多肽类抗生素,主要用于治疗多药耐药G-菌引起的感染。多粘菌素E生产菌种遇到一个关键问题:菌种不稳定,保藏过程中易死亡,生产过程中菌体易自溶,从而影响发酵水平。本文主要研究多粘类芽孢杆菌保藏方法及复壮方法、多粘菌素E对产生菌的损伤机制及其防护措施、多粘菌素E发酵工艺。通过对多粘类芽孢杆菌保藏方法及复壮方法研究,发现菌种以20%脱脂奶粉为保护剂经冻藏的存活率是冻干的17.3倍。20%脱脂奶粉中加入海藻糖,冻干的存活率提高约5.0倍。冻藏6个月的菌种经3次循环分离纯化,产抗生素能力最高可恢复至93.0%,经1次抗性平板分离纯化,产抗生素能力最高恢复至81.0%。通过多粘菌素E对产生菌的损伤机制及其防护措施的研究,发现高浓度多粘菌素E对产生菌具有损伤作用,并初步推测增加细胞膜透性是多粘菌素E对G+菌产生抑制作用的机理之一。二价阳离子Ca2+,Mg2+对多粘类芽孢杆菌具保护作用。Ca2+的保护作用比Mg2+强。通过对多粘菌素E发酵工艺的优化,用20%葡萄糖和80%可溶性淀粉作为复合碳源,摇瓶生产水平多粘菌素E效价提高了 77.2%。基于原配方、新配方5L罐补料工艺,多粘菌素E效价分别是不补料发酵工艺的7.6倍和5.4倍,大大提高了多粘菌素E的合成。
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