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第一部分Nek2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响目的设计合成有效的Nek2-siRNA，转染入卵巢癌SKOV3细胞，观察NEK2表达的变化及其对SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及细胞周期的影响。方法1.采用免疫组织化学法检测Nek2在上皮性卵巢癌组织中的表达情况。2.采用化学合成法，设计三条针对Nek2基因的siRNA，转染入卵巢癌SKOV3细胞48小时后，分别采用Real-time RT-PCR技术及Westernblotting技术检测Nek2基因和蛋白表达水平的变化，筛选出一条干扰效果最好的Nek2-siRNA以进行后续实验。3.将Nek2-siRNA转染入卵巢癌SKOV3细胞后，采用MTT法检测SKOV3细胞增殖能力的变化；采用流式细胞技术检测SKOV3细胞凋亡和细胞周期的变化；采用Transwell小室检测SKOV3细胞迁移及侵袭能力的变化。结果1.在上皮性卵巢癌组织中Nek2的表达水平明显增高。2. Nek2-siRNA转染SKOV3细胞48小时后，与对照组相比，Nek2的mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05），其中干扰组2（NEK2-siRNA序列2）下降最为明显。空白对照组与阴性对照组相比，无统计学差异（P＞0.05）。3.通过对转染后48小时及72小时的各组细胞进行MTT法检测发现：Nek2-siRNA干扰组细胞增殖能力显著低于空白对照组细胞和阴性对照组细胞，抑制率分别为32.1%，43.8%，（P＜0.05）。4. Nek2-siRNA转染48小时后，流式细胞技术检测凋亡结果显示，空白对照组、阴性对照组和RNA干扰组的SKOV3细胞凋亡率分别为：(5.00±0.09)%、(5.53±0.24)%和(10.98±0.16)%，（P＜0.05）。流式细胞技术检测细胞周期的结果显示，空白对照组、阴性对照组和RNA干扰组处于G2/M期的细胞比例分别为：13.72%、12.27%和1.56%，与对照组相比较，处于G2/M期的干扰组细胞明显减少（P＜0.05）。5. Nek2-siRNA转染48小时后，迁移实验结果显示：空白对照组、阴性对照组和干扰组的穿膜细胞数分别为（351.3±14.2）、（360.7±11.1）、（95.7±6.2），干扰组与对照组相比迁移细胞数明显下降（P＜0.05）。侵袭实验结果显示：空白对照组、阴性对照组和干扰组的穿膜细胞数分别为（340±17.3）、（329.3±13.6）、（27.3±5.1），干扰组与对照组相比侵袭细胞数明显下降（P＜0.05）。结论1. Nek2在上皮性卵巢癌组织以及细胞中高表达，且RNAi干扰技术能有效的抑制其表达。2. Nek2-siRNA转染能使卵巢癌SKOV3细胞增殖减弱、凋亡增加以及迁移侵袭能力下降，细胞进入G2/M期受阻，导致细胞最后不能顺利通过有丝分裂期，进入下一个细胞周期。3. Nek2可作为抑制卵巢癌转移和复发的重要靶点。第二部分NEK2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞生物学行为影响的分子机制的初步研究目的初步研究Nek2-siRNA转染对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及其细胞周期影响的相关分子机制。方法1. Western blotting技术检测Nek2-siRNA转染入卵巢癌SKOV3细胞48小时后，与凋亡相关的因子Caspase-3、Bad及Bcl-2蛋白表达水平的变化。2. Western blotting技术检测Nek2-siRNA转染入卵巢癌SKOV3细胞48小时后，与侵袭转移相关的因子MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白表达水平的变化。3. Western blotting技术检测Nek2-siRNA转染入卵巢癌SKOV3细胞48小时后，与细胞周期相关的因子cyclinB1、CDK1及P27蛋白表达水平的变化。4. Western blotting技术检测Nek2-siRNA转染入卵巢癌SKOV3细胞48小时后，ERK1/2磷酸化水平的变化。结果1. Western blotting技术检测结果表明：NEK2基因沉默后，与对照组相比，SKOV3细胞内Caspase-3和促凋亡因子Bad的蛋白表达增加，而抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达降低（P＜0.05）。2. Western blotting技术检测结果表明：NEK2基因沉默后，与对照组相比，SKOV3细胞内MMP-2、MMP-9的表达明显下降，而TIMP-1的表达显著上调（P＜0.05）。3. Western blotting技术检测结果表明：NEK2基因沉默后，与对照组相比，SKOV3细胞内cyclinB1和CDK1的蛋白表达水平较对照组明显下降，P27的蛋白表达水平明显上调（P＜0.05）。4. Western blotting技术检测结果表明：NEK2基因沉默后，与对照组相比，SKOV3细胞内ERK1/2磷酸化水平明显下降（P＜0.05）。结论1.抑制Nek2基因的表达可上调caspase-3及Bad的蛋白表达水平，下调Bcl-2的蛋白表达水平，从而抑制卵巢癌SKOV3细胞促进细胞凋亡。2.抑制Nek2基因的表达可上调TIMP-1的蛋白表达水平，使MMP-2及MMP-9的蛋白表达水平下降，从而抑制了卵巢癌SKOV3细胞的迁移和侵袭。3.抑制Nek2基因的表达可上调P27的蛋白表达水平，下调cyclinB1及CDK1的蛋白表达水平，从而阻止SKOV3细胞进入G2/M期，不能启动有丝分裂，无法进入下一个细胞周期，抑制了卵巢癌SKOV3细胞增殖。4. Nek2通过ERK信号转导通路调控卵巢癌SKOV3细胞的生物学行为。