【摘 要】
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第一部分Hsa_circ_0002320在结直肠癌中的表达及与临床病理特征之间的关系目的:环状RNA在多种恶性肿瘤疾病中发挥重要调控作用,但hsa_circ_0002320在结直肠癌(CRC)中的作用机制和临床价值仍不清楚。本研究旨在探讨hsa_circ_0002320在临床结直肠癌中的表达情况及与临床病理特征之间的关系。方法:1.将获取的临床CRC组织及其邻近正常的结直肠粘膜组织用4%多聚甲醛固
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第一部分Hsa_circ_0002320在结直肠癌中的表达及与临床病理特征之间的关系目的:环状RNA在多种恶性肿瘤疾病中发挥重要调控作用,但hsa_circ_0002320在结直肠癌(CRC)中的作用机制和临床价值仍不清楚。本研究旨在探讨hsa_circ_0002320在临床结直肠癌中的表达情况及与临床病理特征之间的关系。方法:1.将获取的临床CRC组织及其邻近正常的结直肠粘膜组织用4%多聚甲醛固定,予以脱水、石蜡包埋及切片后用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察病理情况。2.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测50例CRC组织及其邻近正常的结直肠粘膜组织中hsa_circ_0002320的表达情况,以及上述50例CRC患者术前血浆和100例健康人血浆中hsa_circ_0002320的表达情况。此外,检测CRC细胞系(HT29、HCT116)与正常结直肠粘膜细胞系(FHC)中hsa_circ_0002320的表达情况。3.分析CRC组织和血浆中hsa_circ_0002320表达与临床病理特征之间的关系。结果:与邻近正常的结直肠粘膜组织相比,CRC组织中hsa_circ_0002320表达显著下调(P<0.05);与之类似,CRC血浆中hsa_circ_0002320表达显著下调(P<0.05)。CRC细胞系(HT29、HCT116)中hsa_circ_0002320的表达较正常结直肠粘膜细胞系(FHC)显著下调(P<0.01)。CRC组织中hsa_circ_0002320的表达与患者的肿瘤分化程度显著相关(P<0.05);CRC患者血浆中hsa_circ_0002320的表达与CEA的水平显著相关(P<0.05)。结论:CRC组织、细胞和血浆中hsa_circ_0002320显著下调,有可能作为CRC诊疗的生物标志物及治疗靶点。第二部分过表达hsa_circ_0002320对结直肠癌的侵袭、迁移、增殖及上皮-间质转化的影响目的:探究hsa_circ_0002320与CRC的侵袭、迁移、增殖及上皮-间质转化的关系。方法:1.构建hsa_circ_0002320重组质粒,在CRC细胞系(HT29、HCT116)中过表达hsa_circ_0002320。2.实时荧光定量PCR检测hsa_circ_0002320在CRC细胞系中的表达。3.通过细胞功能实验检测过表达hsa_circ_0002320对CRC细胞系侵袭、迁移、增殖能力的影响。4.采用Western blot检测CRC细胞上皮-间质转化相关的上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:过表达hsa_circ_0002320组中CRC细胞的侵袭、迁移、增殖能力较阴性对照组显著降低;上皮-间质转化相关的蛋白中,N-cadherin和Vimentin的表达较阴性对照组显著降低,而E-cadherin的表达较阴性对照组显著增高(P<0.01)。结论:过表达hsa_circ_0002320抑制结直肠癌的侵袭、迁移、增殖及上皮-间质转化。第三部分Hsa_circ_0002320在结直肠癌患者诊断及预后中的作用目的:探究hsa_circ_0002320对CRC诊断和预后的价值。方法:1.分析CRC患者hsa_circ_0002320的表达、临床病理特征和总生存期(OS)之间的关系。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析hsa_circ_0002320对CRC诊断的灵敏性及特异性。2.利用生物信息学验证hsa_circ_0002320对CRC患者预后的影响。结果:Hsa_circ_0002320的表达水平与CRC患者OS显著相关(P<0.01),即hsa_circ_0002320高表达时,CRC患者的OS越长;hsa_circ_0002320高表达的危险比(hazardratio,HR)为0.161[95%可信区间(confidence interval,CI),0.066-0.393;P<0.000]。Hsa_circ_0002320的表达对CRC诊断的ROC曲线下面积(AUC)为0.823,高于CEA(AUC=0.764)。Kaplan-Meier分析显示低表达hsa_circ_0002320的CRC患者OS低于高表达hsa_circ_0002320的CRC患者。结论:Hsa_circ_0002320可能是CRC患者新型、非侵入性的血液生物标志物,用于CRC的诊断和判断预后。
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