番茄高频转化体系的建立及RNAi载体构建的研究

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番茄作为一种重要的蔬果作物,是世界上重要的食用经济作物之一。番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是双生病毒科菜豆金色花叶病毒属,通过烟粉虱来传播,其引起的病毒会导致番茄大规模的减产,同样给予菜农经济上的损失。控制番茄黄化曲叶病毒病的有效方法是培养新的抗病毒品种。集高效性、可遗传性、特异性和生物安全性于一身的RNAi技术成为了抗病育种的有效方法之一。本研究通过选取TYLCV病毒基因组上的保守基因片段V1,验证其转基因番茄对病毒的抗性。将V1片段以正反两向连接pFGC5941载体中内含子两端,构建RNAi载体pFGC5941-V1B-V1A。将RNAi载体pFGC5941-V1B-V1A的RNAi转化到农杆菌GV3101中,留作农杆菌侵染实验。用携带pFGC5941-V1B-V1A的RNAi载体的农杆菌来侵染处于2-3叶期的番茄幼苗;20d后,用农杆菌介导法通过携带TYLCV全基因组的质粒来侵染番茄植株,通过观察番茄植株发病症状态和对其病毒DNA的扩增,检测片段V1的抗病效果。显示结果为,片段V1可以引起siRNA的机制,遏制或削弱番茄植株中TYLCV基因的积累。在番茄愈伤组织培育过程中,子叶诱导愈伤和不定芽发生的效果最好,其最适培养基为MS+0.2mg/L IAA+1.0mg/L6-BA,最适生根培养基为MS+0.1mg/L IAA;通过实验数据比较,农杆菌介导转化番茄的最适侵染时间为20min后培养2d,农杆菌浓度为OD600=0.2。
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