利用U3RNA基因上游启动区构建高效表达载体对烟草的转化

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番茄U3RNA基因由RNA聚合酶Ⅲ来转录,具有较高的转录效率,为一般转录效率的100-1000倍.分别将U3RNA基因上游启动区-ACC合成酶的反义RNA-核酶嵌合序列和ACC合成酶的反义RNA-核酶嵌合序列克隆到植物双元表达载体pGA643中,得到pGU3R、pGR.用三亲融合法导入农杆菌LBA4404中,采用叶盘法转化烟草,诱导再生小植株,获得了卡那霉素的抗性植株.提取植物总DNA,分别用启动区序列和ACC合成酶的反义RNA-核酶嵌合序列作探针,通过Southern杂交检测,已筛选出整合有外源基因的工程植株.为进一步研究U3RNA上游启动区增强反义RNA-核酶基因的表达奠定了基础.
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