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目的: 应用阿托伐他汀(atorvastatin,ATV)预处理大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs),将其注射至糖尿病大鼠体的玻璃体腔,观察预处理的BMSCs能否改善糖尿病大鼠的视网膜微血管病变,并探讨BMSCs对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的治疗机制. 方法: 1.原代提取BMSCs、培养、传代,鉴定获取BMSCs的免疫表型. 2.利用不同浓度的ATV处理BMSCs,通过免疫荧光法、免疫印迹法(western-blotting)、实时定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测BMSCs中CXC趋化因子4(CXC chemokine receptor4,CXCR4)基因表达的情况;利用MTS细胞增殖法检测ATV预处理后BMSCs的增殖能力,观察其增殖情况.利用transwell小室法,在基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)的诱导下,对ATV预处理后BMSCs迁移能力进行检测,观察其迁移情况.利用流式细胞仪对ATV预处理后BMSCs凋亡程度进行检测,观察其凋亡情况. 3.将普拉格-杜勒(Sprague Dawley,SD)大鼠腹腔注射链尿佐菌素(streptozocin,STZ)诱导其建立糖尿病模型.4周后,将ATV预处理的BMSCs(5μl,3x104cells)一次性注射到糖尿病大鼠玻璃体腔体内,检测各组大鼠玻璃体腔注射前3周及后3周的血糖、体重等全身情况.动物实验分组:1.正常对照组(正常组);2.糖尿病大鼠对照组(Blank组);3.未经预处理的BMSCs移植组(MSC组);4.经ATV处理的BMSCs移植组(ATV-MSC组).造模成功后进行干预治疗.MSC组:玻璃体腔注射未处理的MSCs、ATV-MSC组:玻璃体腔注射ATV处理的MSCs、正常对照组和Blank组:不做特殊处理.玻璃体腔注射后1周、2周、3周分别对各组进行实验检测:视网膜石蜡切片HE染色,western-blotting、免疫组织化学法.观察各组大鼠视网膜病理组织变化,视网膜中视紫红质酶(Rhodopsin)、神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)及白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α蛋白表达变化,将各组数据统计并进行对比得出结论. 结果: 1.成功分离、提取、培养、鉴定SD大鼠BMSCs. 2.BMSCs通过ATV预处理后,免疫荧光法、western-blotting法、RT-PCR法均显示其可过表达CXCR4基因.利用MTS细胞增殖法检测,各组BMSCs细胞增殖能力没有统计学差异(p>0.05).利用transwell小室法检测检测,ATV-MSCs组较其他组BMSCs迁移能力有所提高,结果具有统计学差异(p<0.05).利用流式细胞仪对细胞凋亡程度的检测,发现各组BMSCs的凋亡程度无统计学差异(p>0.05). 3.视网膜石蜡切片HE染色显示ATV-MSCs组视网膜炎症情况较其他组程度减轻.western-blotting和免疫组织化学法显示,ATV-MSCs组视网膜中Rhodopsin、NSE蛋白表达较其他组升高,有统计学差异(p<0.05),炎症因子IL-6、TNF-α蛋白表达较其他组降低,有统计学差异(p<0.05). 结论: 1、本研究利用ATV预处理的BMSCs,发现在体外环境下,BMSCs经过ATV处理,可通过提高CXCR4的表达来显著增加迁移、归巢能力,为经特殊处理MSCs治疗DR提供理论基础. 2、本研究首次利用ATV预处理的BMSCs进行糖尿病大鼠玻璃体腔注射,发现ATV预处理的BMSCs可更有效的减轻其视网膜炎症程度,并且可通过调控相关因子的表达,起到对DR中视网膜的保护作用,为MSCs治疗DR开辟崭新思路.