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生长激素是一种具有多种生理功能的肽类激素，其生理作用包括促进生长，调节能量代谢，参与性腺发育过程，食欲调节及影响群体行为。促生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone, GHRH)和脑垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide， PACAP)是两种重要的生长激素促释放因子。过去曾误认为这两个激素在鱼类中是由同一个基因编码的，最近科学家在鱼类中分离出一种与哺乳类GHRH同源性很高的肽类激素，发现该激素具有强的促生长激素释放能力。因此将该基因命名为促生长激素释放激素，而将于PACAP共编码的蛋白命名为PRP或GHRH-LP。然而，目前关于这两个激素的生理作用，结构，组织表达等还缺乏深入研究，开展这方面研究对于阐明这两个激素的功能具有重要的意义。
大口黑鲈(Micropterus salmoides(Lacépède)，俗名大口黑鲈，隶属鲈形目(Perciformes)、鲈亚目(Porcoidei)、太阳鱼科(Cehtrachidae)、黑鲈属(Micropterus)，是我国重要的淡水养殖品种，但是目前国内养殖的大口黑鲈仍是20多年前引进的野生种繁育后代，群体性状分化严重，常导玫养殖过程中大吃小，上市规格不一致等现象的发生，影响了大口黑鲈的养殖效益。因此，开展大口黑鲈良种选育工作对于产业发展具有迫切的现实的意义。
本研究旨在通过大口黑鲈GHRH和PACAP基因的克隆，研究其组织表达及促生长作用，为阐明鱼类的生长内分泌网络提供依据；并将其作为候选功能基因筛选SNP，对SNP位点与生长性状进行相关分析，获得与大口黑鲈生长紧密关联的SNP分子标记，为分子标记辅助育种奠定基础。具体研究结果如下：
1.大口黑鲈GHRHcDNA序列629bp，编码140个氨基酸，成熟肽长27aa,与青鳉GHRH的相似性最高，为100％；与其它两栖类及鱼类的同源性介于70％-96％；大口黑鲈PACAP/GHRH-LP基因存在两种cDNA序列，其中序列a全长786bp，编码PACAP和GHRH-LP;序列b全长为789bp，仅编码PACAP。序列同源性分析结果表明，大口黑鲈与青鳉和牙鲆的GHRH-LP的相似性最高，达到96％，与其它鱼类和两栖类的同源性在41％-78％;PACAP与其它鱼类的同源性在90％以上。大口黑鲈GHRH和GHRH-LP基因均由5个外显子及四个内含子组成，但在外显子布局上存在较大差异
2.PACAP-PRP基因在大口黑鲈体内存在两种mRNA转录本，长可变剪切mRNA(longformvariationtypemRNA,LVmRNA)编码PACAP和PRP两个蛋白；短可变剪切mRNA(shortformvariationtypemRNA,SVmRNA)编码PACAP蛋白。组织分布研究表明，两种mRNA在不同组织具有类似的表达特征，在中枢神经系统以前脑表达量最高，其次为延脑、中脑，垂体和小脑；在外周组织中，以胃表达量最高，其次为小肠、肾、肌肉、脾，鳃，在心，脂肪，肝中不表达。但是，在中枢神经系统SVmRNA的含量比LVmRNA的含量要高，而在胃LVmRNA含量则比SVmRNA高。而GHRH基因仅在前脑和延脑中表达，两者间具有较大分布差异。
3.在胚胎发育和仔鱼早期发育过程中，GHRH在神经胚后期检测到表达，其表达水平在出膜后显著提高；PACAP-PRP基因mRNA首先在囊胚中期检测到，并在后续发育各时期保持较高水平的持续表达，两者间的表达时序上具有较大差异。
4.禁食实验表明，禁食能够显著降低PACAP基因在大脑中的表达水平；且随着禁食时间的延长基因表达水平的下调增强，但是在禁食结束后基因表达水平迅速的提高，表明PACAP蛋白是作为一种厌食因子参与大口黑鲈的摄食调节。
5.克隆了大口黑鲈(Micropterus salmoide)促生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone，GHRH)基因启动子序列，该序列全长1452bp，预测存在TATA框、CAAT框和八聚体转录因子1(Oct-1)结合位点启动子等基本转录元件。含有上游激活因子USF结合位点1个，核转录因子SP1结合位点4个，AP1转录因子结合位点1个，神经特异转录因子NF-1转录因子结合位点4个，甲状腺激素应答受体T3R结合位点1个。在大口黑鲈GHRH基因启动子上还发现一个66bp长度的Indel突变位点，经软件预测，该突变位点上存在Homeobox,FoxO转录因子结合位点各一个。针对该位点选取杂合子基因型亲本构建AB×AB家系，后代基因型频率显示纯合缺失突变BB型个体在出膜前死亡。利用实时定量PCR技术检测同一家系内不同基因型个体间基因的表达量，结果表明，AA基因型个体(9个样本)GHRH的表达量比AB基因型(10个样本)个体表达量偏高约19％，但差异未达显著水平(p＞0.05)。在随机群体中验证结果表明，A(野生型)等位基因频率(0.856)明显高于B(突变型)等位基因(0.144)，群体处于平衡状态(p=0.17)，但未检测到BB型个体。AA型与AB型个体在体重、体长、体宽方面均没有显著差异。群体关联，家系验证结果均表明，该位点纯合子突变个体(BB)无法存活，AB及AA个体间基因表达水平及生长性状间没有显著差异。