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研究目的和内容本研究主要对8个新型抗耐药结核药物候选物的成药性进行了初步研究,具体包括:(1)分别建立血浆等生物基质中HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、HY152-M和HY152-P 8个候选药物的HPLC-MS/MS检测方法,并按照生物样品定量分析方法验证指导原则进行方法学验证;(2)用建立的方法分别进行8个候选药物大鼠单剂量(50mg/kg)灌胃给药及单剂量(5 mg/kg)静脉注射给药后的药动学研究;(3)筛选出一个药代动特性良好的候选药物,并评价该候选药物进行大鼠单次单剂量(50mg/kg)灌胃给药后主要组织中药物分布情况和多次(连续7天,每天1次)单剂量灌胃给药后体内药物蓄积情况;(4)建立Caco-2细胞单层模型,采用HPLC-MS/MS法初步考察该候选药物与转运蛋白P-糖蛋白的相互作用;(5)对该候选药物进行大鼠在体肠吸收动力学研究,考察该候选药物在大鼠不同肠段的吸收动力学特性;(6)对该候选药物进行初步的安全性评价。研究结果(1)建立了快速、灵敏和准确的HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、HY152-M和HY152-P生物样品HPLC-MS/MS分析方法,并对分析方法进行了考核,方法的精密度、准确度等各项指标经过确证后,符合生物样品测定的相关规范。(2)大鼠分别单次静脉注射给予5 mg/kg的HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、HY152-M和HY152-P后,平均血浆消除半衰期分别为54.1、43.5、91.1、86.9、129、32.6、78.2和63.3 min;平均血浆清除率分别为0.009、0.039、0.036、0.014、0.016、0.013、0.018和0.011 L/min/kg,其中HY152-D的平均血浆清除率为大鼠肝脏全血流量(约0.055 L/min/kg)的70.9%,属高清除药物,而HY152-E和HY152-M的平均血浆清除率分别为大鼠肝脏全血流量的65.5%和33.0%,属于中等清除药物,其余候选物的平均血浆清除率均小于大鼠肝脏全血流量的30%,为低清除药物;平均表观分布容积分别为0.67、2.49、4.82、1.79、3.20、0.59、2.04和1.00 L/kg。大鼠分别单次灌胃给予50 mg/kg的HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、HY152-M和HY152-P后,平均血浆消除半衰期分别为126、105、66.7、171、137、55.1、323和186 min,平均血浆峰浓度分别为16.4、7.6、5.9、6.1、14.8、34.3、2.5和0.1μg/mL。经过计算,HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、hy152-m和hy152-p的绝对生物利用度分别为13.3%、53.0%、32.0%、58.2%、133%、242%、13.3%和0.97%。8个候选物的大鼠体内主要药动学参数无明显性别差异(p>0.05)(3)经过8个候选药物的大鼠体内药动学研究,最终筛选出了一个药代动特性良好的候选药物hy152-j。大鼠单次灌胃给药50mg/kg的hy152-j后,药物广泛分布于心、肝、脾、肺、肾组织中,主要组织中浓度高于血浆浓度,组织中的达峰时间为给药后4h,且给药12h后组织中浓度低于峰浓度的20%。多次(连续7天,每天1次)给药后,主要组织中未发现药物蓄积。(4)用于转运实验的caco-2细胞能够形成致密、完整以及功能良好的均匀单层细胞;不同浓度的候选药物hy152-j从肠腔侧到基底侧的表观渗透系数在1.76×10-5-2.61×10-5cm/s的范围内;不同浓度hy152-j从基底侧到肠腔侧的表观渗透系数与肠腔侧到基底侧的比值介于0.74-1.27之间;与阴性对照组相比,hy152-j在0.625–10μmol/l范围内并没有明显降低caco-2细胞单层模型中地高辛的外排比。(5)候选药物hy152-j在大鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收速率常数和表观渗透系数无显著性差异(p>0.05);与低浓度(25μg/ml)组相比,高浓度(100μg/ml)组中hy152-j的吸收速率常数和表观渗透系数均存在非常显著性差异(p<0.01),中浓度(50μg/ml)组中hy152-j的表观渗透系数存在显著性差异(p<0.05);不同ph的介质对吸收速率常数和表观渗透系数均无显著性影响(p>0.05);p-糖蛋白抑制剂对hy152-j的肠吸收没有显著性影响(p>0.05)。(6)急性毒性试验结果表明,icr小鼠分别灌胃给予5g/kg、4g/kg、3.2g/kg、2.56g/kg和2.05g/kg的hy152-j,在两周的观察期内,除了最低剂量组之外,其余各个剂量组均出现小鼠死亡,经过计算,雄性小鼠ld50值为3.264g/kg、雌性小鼠ld50值为3.416g/kg。长期毒性试验结果表明,sd大鼠灌胃给予250mg/kg的hy152-j一个月后,实验组大鼠前三周的摄食量与对照组相比均存在显著性差异(p<0.05),实验组大鼠体重与照组相比不存在统计学差异,但有减小趋势;血液学检查未见与药物有关的明显毒性反应;血生化检查发现,实验组大鼠与照组相比alt、tp、alb、chol、ast、tg、pt指标在统计学上存在差异(p<0.05或p<0.01);实验组大鼠肝脏的脏器系数与照组相比存在非常显著性差异(p<0.01);组织病理学检查发现实验组大鼠的肝脏出现了一定程度的脂肪变性。结论本文从药代动力学角度对8个新型抗耐药结核药物候选物的成药性进行初步研究,筛选出了药代动特性良好的候选药物hy152-j,然后进一步对其进行药代动力学研究和安全性评价。研究结果表明,HY152-J的大鼠口服绝对生物利用度为58.2%;大鼠口服灌胃给药后4 h在组织中浓度达最大值,大量分布于心、肝、脾、肺、肾组织中;多次给药后,组织中未发现蓄积;HY152-J不是P-糖蛋白的底物,且对P-糖蛋白不具有抑制作用;HY152-J在不同肠段均有吸收,且无明显的特定吸收部位;在25μg/mL至100μg/mL范围内,随浓度增大,其吸收有逐渐饱和趋势,初步推断HY152-J的吸收机制为主动转运;HY152-J的雄性小鼠LD50值为3.264 g/kg,雌性小鼠LD50值为3.416 g/kg,属于低毒化合物;血液生化、系统尸检、脏器系数、组织病理学检查均发现与药物相关的肝毒性反应,推测HY152-J的主要毒性靶器官可能为肝脏。